1、在癌細(xì)胞中，由于基因突變而異常高表達(dá)的蛋白常常分泌到血液中成為臨床腫瘤檢測(cè)的生物標(biāo)志物，為癌癥早期的診斷和治療提供了依據(jù)。然而，這些標(biāo)志物在腫瘤早期的含量往往是極低的，這就對(duì)準(zhǔn)確的臨床預(yù)測(cè)診斷造成了困難。鄰位連接技術(shù)作為一種體外蛋白分析方法，由于其具有很高的檢測(cè)靈敏度，因而近年來(lái)得到廣泛應(yīng)用。我們以免疫微球作為介質(zhì)應(yīng)用固相鄰位連接技術(shù)(spPLA)檢測(cè)前列腺特異性抗原(PSA)，其最低檢測(cè)限為0.1pM，與免疫PCR相比，背景信號(hào)值更低

2、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性更好。并且將spPLA與環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）相結(jié)合，能夠檢測(cè)到PSA的最低濃度為0.001pM，是傳統(tǒng)免疫檢測(cè)的100倍。為了使實(shí)驗(yàn)操作更簡(jiǎn)便，同時(shí)避免因洗滌微球帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)誤差，我們用戊二醛處理過(guò)的定量PCR管代替免疫微球，建立了一種以定量PCR管為固定相的更高效靈敏的蛋白檢測(cè)方法。該方法整個(gè)檢測(cè)過(guò)程都在定量PCR管中進(jìn)行，洗滌方便，抗體固著穩(wěn)定，對(duì)PSA和野生型p53的檢測(cè)靈敏度為0.001 pM，并且能夠達(dá)到7個(gè)

3、數(shù)量級(jí)的檢測(cè)范圍。而且，我們將突變體p53特異性抗體PAb240包被在管壁上，應(yīng)用管壁spPLA可以檢測(cè)到血清中的突變體p53最低濃度為0.01pM，其檢測(cè)靈敏度大約是傳統(tǒng)ELISA檢測(cè)的500倍。管壁spPLA能夠高效、靈敏檢測(cè)血清中痕量蛋白，并且操作簡(jiǎn)單方便，有望成為癌癥早期臨床診斷的重要手段。
　　由于小分子化合物自身結(jié)構(gòu)的原因，兩個(gè)抗體無(wú)法同時(shí)識(shí)別一個(gè)小分子，因此鄰位連接技術(shù)(PLA)一直無(wú)法應(yīng)用于小分子的高靈敏度檢測(cè)。我

4、們的研究將多個(gè)小分子化合物偶聯(lián)到BSA上制成抗原，應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)免疫微球spPLA成功的檢測(cè)了萊克多巴胺和克倫特羅兩種“瘦肉精”小分子。其檢測(cè)靈敏度達(dá)到了0.01ng/ml，是傳統(tǒng)免疫方法靈敏度的10-50倍，檢測(cè)范圍為7個(gè)數(shù)量級(jí)。與直接競(jìng)爭(zhēng)法相比，間接競(jìng)爭(zhēng)法將抗原直接包被于免疫微球上，能夠大大的節(jié)省抗體的使用量，檢測(cè)的線性范圍更好。并且將萊克多巴胺小分子化合物稀釋在不同的生物介質(zhì)（尿液、血清和組織提取液）中，其檢測(cè)靈敏度依然很高，檢測(cè)范圍不