1、目的:觀察eNOS基因第4內(nèi)含子的27bp VNTR、第7外顯子G894T多態(tài)性基因型頻率和等位基因頻率在中國廣西漢族人群中的分布特點，分析其與Perthes病發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系，旨在探討Perthes病的病因和發(fā)病機制，從遺傳分子生物學(xué)角度為Perthes病的防治提供一個新思路和新途徑。
　　方法:本研究采用病例對照研究，分別設(shè)對照組、Perthes病組。選擇廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院創(chuàng)傷骨科門診和病房住院就醫(yī)的2013年10月至20

2、14年9月Perthes病患兒80例。另選健康體檢門診人群100例作為對照組，其年齡、性別與Perthes病組相匹配。兩組人群都排除有明顯的血管疾病史。兩組人群均遵循了知情同意的原則。所有符合標準的研究人群均抽取外周靜脈2ml EDTA抗凝全血，應(yīng)用試劑盒提取白細胞基因組DNA。采用聚合酶鏈(PCR)或采用聚合酶鏈反應(yīng)限制片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)測定兩組人群的eNOS基因27bp VNTR、 G894T多態(tài)性的基因型，在2

3、％的瓊脂糖凝膠中穩(wěn)壓電泳，在紫外成像儀上檢測結(jié)果，分析記錄電泳圖譜，根據(jù)電泳條帶bp值判斷每個樣本基因型。以基因計數(shù)法計算Perthes病患兒和與之相匹配的正常人群中的基因型及等位基因頻率，用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對兩組人群之間進行用x2檢驗及Hardy-Weinberg平衡(HWE)以評估標本群體代表性，各基因型及等位基因頻率分布差異行x2檢驗，并計算比值比(0R)及95％可信區(qū)間(95％CI)，以估算基因位點的變異對Perthes

4、病發(fā)生的相對危險度。并將自己的研究結(jié)果與國內(nèi)外相關(guān)的研究結(jié)果相比，觀察eNOS基因多態(tài)性是否存在有種族及民族差異。結(jié)果:Perthes病組及正常對照組的基因型及等位基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡。Perthes病組中eNOS基因27bp VNTR等位基因的bb型、ab型的出現(xiàn)頻率分別為:58例(72.5％)、22例(27.5％);正常對照組86例(86％)、14例(14％)。稀有的aa型在本研究中未發(fā)現(xiàn)。ab基因型較bb

5、基因型對Perthes病的OR為2.33(95％CI1.10-4.92)。a等位基因型較b等位基因?qū)erthes病的OR為2.12(95％CI1.05-4.29)。經(jīng)PCR-RLFP分析二組的eNOS外顯子7 G894T等位基因的GG野生型、GT雜合型、TT純合突變型的出現(xiàn)頻率分別為:Perthes病組50例(62.5％)、28例(35％)、2例(2.5％)，正常對照組81例(81％)、17例(17％)、2例(2％);GT基因型較GG

6、基因型對Perthes病的OR為2.67(95％CI1.33-5.36)。T等位基因型較G等位基因?qū)erthes病的OR為2.13(95％CI1.18-3.87)。廣西漢族人群與其他種族人群的eNOS基因27bp VNTR和外顯子7 G894T基因型頻率、等位基因頻率經(jīng)x2檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.首次在中國人群中發(fā)現(xiàn)eNOS基因和Perthes病的產(chǎn)生可能存在關(guān)聯(lián)性。2.發(fā)現(xiàn)eNOS基因內(nèi)含子4的