1、背景：
　　非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）是近年來(lái)被人們逐漸認(rèn)識(shí)的一種多因素導(dǎo)致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪蓄積過(guò)多的慢性進(jìn)展性病變。隨著社會(huì)發(fā)展和生活方式的變化，環(huán)境污染、藥物濫用的廣泛存在，近年來(lái)NAFLD在全球的發(fā)病率不斷攀高，對(duì)人類的健康和社會(huì)的發(fā)展構(gòu)成嚴(yán)重危害。+（PXR）是核受體超家族NR1I2的成員之一，在新陳代謝、機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育以及病理生理過(guò)程等方面都發(fā)揮著重要的功能，近年發(fā)現(xiàn)其在糖異生、脂類代謝以及膽汁平衡中也具有重要的作用。

2、前期研究發(fā)現(xiàn)PXR在防御外源物侵襲，加速其體內(nèi)代謝和排出的同時(shí)，也會(huì)導(dǎo)致肝脂肪性病變等損傷的發(fā)生。
　　目的：
　　通過(guò)研究，探討PXR基因的單核苷酸多態(tài)性與NAFLD的相關(guān)性，明確PXR在NAFLD中的關(guān)鍵作用。
　　方法：
　　1、采用一代測(cè)序檢查PXR外顯子2中SNP，統(tǒng)計(jì)分析其SNP與NAFLD的關(guān)聯(lián)性。收集100例臨床外周血液，分為NAFLD組和健康對(duì)照組。其中NAFLD組51人，健康對(duì)照組49人。分別

3、提取各樣品DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），用1％瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證擴(kuò)增得到的目的片段542bp，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。統(tǒng)計(jì)分析測(cè)序結(jié)果，計(jì)算相應(yīng)的基因頻率和基因型頻率以及各基因型分布在兩組間的差異，通過(guò)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測(cè)分析樣本是否具有群體代表性。
　　2、采用一代測(cè)序檢查PXR外顯子4中SNP，統(tǒng)計(jì)分析其SNP與NAFLD的關(guān)聯(lián)性。收集100例臨床外周血液，分為NAFLD組和健康對(duì)照組，分組情況同上。利

4、用東盛生物試劑盒提取各樣品DNA，利用超微量蛋白核酸分析儀檢測(cè)提取出的DNA是否符合要求。將符合要求的DNA進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)，用3%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證擴(kuò)增得到的目的片段722bp，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。計(jì)算相應(yīng)基因頻率和基因型頻率，統(tǒng)計(jì)分析各基因型在兩組間的分布情況，通過(guò)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測(cè)分析樣本是否具有群體代表性。
　　3、采用一代測(cè)序檢查PXR外顯子6中SNP，統(tǒng)計(jì)分析其SNP與NAFLD的關(guān)聯(lián)性。樣品來(lái)源

5、及分組同上。實(shí)驗(yàn)流程與上述相似。利用試劑盒提取各樣品DNA后進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)，PCR產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，判斷PCR得到所需目的片段250bp。PCR產(chǎn)物測(cè)序。通過(guò)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測(cè)分析樣本是否具有群體代表性，統(tǒng)計(jì)分析相應(yīng)基因頻率和基因型頻率。
　　4、采用一代測(cè)序檢查PXR外顯子8中SNP，統(tǒng)計(jì)分析其SNP與NAFLD的關(guān)聯(lián)性。樣品來(lái)源及分組同上。DNA提取方法同上，提取DNA后進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)，PC

6、R產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)判斷是否得到210bp目的片段。PCR產(chǎn)物測(cè)序。通過(guò)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測(cè)分析樣本是否具有群體代表性，統(tǒng)計(jì)分析相應(yīng)基因頻率和基因型頻率。
　　5、采用一代測(cè)序檢查PXR基因rs2461823位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)分析其與NAFLD的關(guān)聯(lián)性。收集300例臨床外周血樣，其中NAFLD組153人，健康對(duì)照組147人。從各樣品種提取DNA，選擇合格DNA進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)，PCR產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖凝膠電泳

7、驗(yàn)證PCR產(chǎn)物為383bp目的片段，PCR產(chǎn)物測(cè)序。統(tǒng)計(jì)分析測(cè)序結(jié)果計(jì)算相應(yīng)基因頻率和基因型頻率，通過(guò)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測(cè)分析樣本是否具有群體代表性。
　　6、采用一代測(cè)序檢查PXR基因rs7643645位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)分析其與NAFLD的關(guān)聯(lián)性。實(shí)驗(yàn)樣品來(lái)源分組及DNA提取、PCR方法同5。PCR產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證PCR產(chǎn)物為256bp目的片段，PCR產(chǎn)物測(cè)序。統(tǒng)計(jì)分析測(cè)序結(jié)果計(jì)算相應(yīng)基因頻率和基因型頻

8、率，通過(guò)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測(cè)分析樣本是否具有群體代表性。
　　7、基于目標(biāo)區(qū)域捕獲測(cè)序方法探討PXR基因SNP位點(diǎn)與NAFLD的關(guān)聯(lián)性研究。收集20例臨床外周血樣，其中NAFLD組10人，健康對(duì)照組10人。從各樣品種提取DNA，進(jìn)行目標(biāo)區(qū)域捕獲測(cè)序，并對(duì)PXR基因多態(tài)性位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析。
　　結(jié)果：
　　1、在PXR基因外顯子2中發(fā)現(xiàn)兩個(gè)SNP位點(diǎn)，稱之為突變1、突變2。結(jié)果顯示突變1：兩組比較其基因型

9、總體分布差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.77。P>0.05）。經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，χ2=0.29，0.750.05），說(shuō)明樣品具有群體代表性。突變2：兩組比較其總體分布差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.10，P>0.05）。經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，χ2=2.00，0.250.05），說(shuō)明樣品具有群體代表性。
　　2、在PXR基因

10、外顯子4中發(fā)現(xiàn)1個(gè)SNP位點(diǎn)，結(jié)果顯示兩組比較其總體分布差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.58，P>0.05）。經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，χ2=0.12，0.900.05），說(shuō)明樣品具有群體代表性。
　　3、在PXR基因外顯子6及外顯子8中暫時(shí)未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)。
　　4、PXR基因rs2461823位點(diǎn)通過(guò)測(cè)序結(jié)果分析，兩組間基因型分布比較差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=71.43，

11、P<0.05）。比較兩組人群各基因型的分布，結(jié)果顯示3種基因型在兩組均有顯著性差異CC（χ2=33.16，P<0.05），TT（χ2=25.86。P<0.05），CT（χ2=50.31，P<0.05）。在等位基因頻率分布分析中，rs2461823位點(diǎn)的等位基因頻率分布有顯著性差異（P<0.0001。OR=0.555，95%CI：0.399-0.773）。經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，χ2=1.99，0.25

12、到遺傳平衡（P>0.05），說(shuō)明樣品具有群體代表性。
　　5、PXR基因rs7643645位點(diǎn)通過(guò)測(cè)序結(jié)果分析，兩組間基因型分布比較差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=103.18，P<0.05）。比較兩組人群各基因型的分布，結(jié)果顯示3種基因型在兩組均有顯著性差異，CC（χ2=42.27，P<0.05），TT（χ2=30.72。P<0.05），CT（χ2=52.91，P<0.05）。經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，χ2=1.5

13、1，0.250.05），說(shuō)明樣品具有群體代表性。
　　6、通過(guò)高通量測(cè)序篩查到PXR中有120個(gè)SNP位點(diǎn)，對(duì)PXR基因多態(tài)性位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析，P均>0.05。
　　結(jié)論：
　　1、在本文中發(fā)現(xiàn)的PXR基因外顯子2及外顯子4中的突變可能與NAFLD不相關(guān)。
　　2、PXR基因rs2461823位點(diǎn)和rs7643645位點(diǎn)可能與NAFLD相關(guān)，且rs2461823位點(diǎn)含等位基因C的基因