納米粒子與生物大分子相互作用的研究及其分析應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、核酸與蛋白質(zhì)是構(gòu)成機體的兩種重要的生物大分子。核酸是生物的基本遺傳物質(zhì),與生物的生長,發(fā)育以及癌變,突變等活動相關(guān)。蛋白質(zhì)則肩負著各種生理上的功能,從整體上維持生物體新陳代謝活動的進行,是生物性狀的直接表達者。因此研究核酸和蛋白質(zhì)與小分子相互作用,建立高靈敏度、低檢測限的核酸和蛋白質(zhì)的定量測定方法,在新型的藥物設(shè)計、抗癌藥物的藥理和毒性的研究,以及臨床檢測等方面具有重要意義,是當(dāng)前生物分析化學(xué)研究的前沿和熱點之一。 本論文從尋找

2、新的核酸和蛋白質(zhì)探針,以建立靈敏的定量檢測的方法出發(fā),以熒光和共振光散射技術(shù)為主要研究手段,同時應(yīng)用吸收光譜技術(shù),圓二色光譜技術(shù),熒光壽命、透射電子顯微技術(shù)等手段進行了機理研究和探討。 第一部分綜述了納米粒子作為光譜探針在核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子分析中的研究進展及分析應(yīng)用。 第二部分研究了桑色素、L-Cys-NZnS和核酸的相互作用。研究表明:L-Cys-NZnS與桑色素作用,使桑色素的熒光強度有所降低,而核酸(fsDN

3、A和yRNA)的加入,可使得體系的熒光強度顯著增強,且增強程度大大超過桑色素-核酸體系的熒光增強作用,體系的熒光的增強程度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,據(jù)此建立了測定核酸的新方法。fsDNA和yRNA的線性范圍分別為:7.0×10-8-1.0×10-5g mL-1,和9.0x10-8-5.0×10-6g mL-1,檢出限分別為2.0x10-8g mL-1和4.0x10-8g mL-1,并成功應(yīng)用于合成樣品中fsDNA的定量

4、測定。morin-L-Cys-NZnS與flsDNA的相互作用機理研究表明:morin-L-Cys-NZnS與fsDNA之間主要為溝槽與靜電作用,并形成三元復(fù)合物,體系微粘度的增大,熒光壽命增長,熒光強度大大增強。 第三部分研究了稀土離子(銪)、L-Cys-NZnS和蛋白質(zhì)的共振光散射增強現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)的加入可以使L-Cys-NZnS-Eu3+體系的共振光散射強度大大增強,由此建立了一種測定蛋白質(zhì)的簡單、靈敏的共振光散射

5、法。在最佳實驗條件下,建立了蛋白質(zhì)濃度與增強的共振光散射強度之間的線性關(guān)系。BSA和EA線性范圍分別為:8.0×10-8-1.4×10-5g mL-1和8.0×10-8-1.2×10-5gmL-1,檢出限分別為3.1×10-8g mL-1和1.7×10-8g mL-1。機理研究表明,Eu3+與L-Cys-NZnS的加入使BSA骨架結(jié)構(gòu)周圍環(huán)境的極性發(fā)生了變化,導(dǎo)致BSA構(gòu)象發(fā)生改變,并形成了較大的聚集體,使體系的共振光散射強度增強。

6、 第四部分研究了納米銀與槲皮素協(xié)同增效作用,建立了核酸測定新方法,并討論了相互作用機理。在最佳實驗條件下,槲皮素-納米銀-核酸體系熒光強度的增強程度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,fsDNA,smDNA和yRNA的線性范圍分別是:8.0×10-9-2.0×10-6g mL-1,5.0×10-8-5.0×10-6gmL-1和2.0×10-8.0×10-6g mL-1,檢出限分別達到4.2×10-9g mL-1,1.2×10-

7、8g mL-1和6.6×10-9g mL-1。該方法具有穩(wěn)定性好,操作簡單和靈敏度高等特點。機理研究表明:納米銀-槲皮素與核酸之間以溝槽式和靜電作用相結(jié)合,導(dǎo)致納米銀的自組裝,形成柳葉片狀的納米晶。 本論文的主要特點: 1、研究發(fā)現(xiàn),L-Cys-NZnS的加入可進一步增強桑色素一核酸的熒光強度,從而建立了測定核酸的熒光新方法,該方法具有靈敏度高,穩(wěn)定性好,抗光漂白性增強等優(yōu)點。 2、研究發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)的加入可以使L

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