1、蛋白質(zhì)之間相互作用在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，本課題組與西北工業(yè)大學(xué)自動化學(xué)院張紹武教授、陳偉博士團隊合作，利用計算機基于蛋白質(zhì)氨基酸序列自相關(guān)函數(shù)及PPI-PKSVM模板的方法，預(yù)測并驗證與p12CDK2-AP1蛋白可能相結(jié)合的CD82蛋白，并通過免疫共沉淀Co-IP的方法進行驗證。通過體外細胞實驗、動物體內(nèi)移植瘤等實驗探討p12CDK2-AP1蛋白與CD82相結(jié)合后對口腔鱗癌細胞OSCC-15的作用機制。
　　目的：

2、　　1．利用基于蛋白質(zhì)氨基酸序列自相關(guān)函數(shù)的計算機方法預(yù)測p12CDK2-AP1與其相互作用的蛋白，并使用計算機相關(guān)模板PPI-PKSVM進行驗證。
　　2．利用Co-IP實驗初步驗證p12CDK2-AP1與CD82相互作用結(jié)果。
　　3．探討p12CDK2-AP1與CD82相結(jié)合后對口腔鱗狀細胞OSCC-15生物學(xué)行為的影響。
　　4．通過裸鼠移植瘤動物實驗探討p12CDK2-AP1和CD82蛋白相結(jié)合后在體內(nèi)對腫瘤

3、發(fā)生、發(fā)展的生物學(xué)作用。
　　方法：
　　1．使用基于蛋白質(zhì)氨基酸序列自相關(guān)函數(shù)的計算機方法和PPI-PKSVM計算機模板技術(shù)預(yù)測并驗證與p12CDK2-AP1蛋白可能相結(jié)合的蛋白。
　　2．利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建pIRES2-EGFP-p12CDK2-AP1和pIRES2-EGFP-CD82真核表達質(zhì)粒。
　　3．將pIRES2-EGFP-p12CDK2-AP1和pIRES2-EGFP-CD82質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至29

4、3T及OSCC-15細胞中，培養(yǎng)0，12，24，48，72小時后，Western blot觀察表達情況并確定表達效率最高時間。利用免疫共沉淀Co-IP方法，初步驗證p12CDK2-AP1與CD82在真核細胞中存在相互作用。
　　4．共同過表達p12CDK2-AP1，CD82基因于OSCC-15細胞，利用MTT實驗方法檢測其對OSCC-15細胞增殖的影響；利用Transwell小室檢測其對OSCC-15細胞侵襲的影響；利用Annex

5、in V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測對OSCC-15細胞凋亡的影響。
　　5．共同過表達p12CDK2-AP1，CD82基因于OSCC-15細胞后，注射于裸鼠右前肢腋下皮內(nèi)，以未轉(zhuǎn)染的OSCC-15細胞為空白對照組，OSCC-15細胞/NC(空白質(zhì)粒)為陰性對照組，注射后7天出現(xiàn)腫瘤，每3天測量腫瘤的最長徑和最短徑，直至注射后25天。計算腫瘤的體積和各組腫瘤的抑制率。
　　結(jié)果：
　　1.使用自相關(guān)函數(shù)計算技術(shù)預(yù)測

6、與p12CDK2-AP1相結(jié)合的10種蛋白。p12CDK2-AP1和CD82氨基酸序列輸入PPI-PKSVM計算機模板，驗證p12CDK2-AP1與CD82能夠結(jié)合。
　　2.成功構(gòu)建pIRES2-EGFP-p12CDK2-AP1和pIRES2-EGFP-CD82真核表達質(zhì)粒。
　　3.過表達p12CDK2-AP1和CD82基因于293T細胞中，并通過Co-IP實驗驗證了p12CDK2-AP1與CD82存在相互作用。

7、　　4.分別過表達p12CDK2-AP1，CD82基因及p12CDK2-AP1/CD82基因組于OSCC-15細胞后，p12CDK2-AP1/CD82組相比其他組對 OSCC-15細胞增殖和侵襲能力有明顯的抑制作用，且明顯促進對OSCC-15細胞的凋亡作用。
　　5.裸鼠移植瘤動物實驗發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染p12CDK2-AP1/CD82基因后可明顯減小轉(zhuǎn)移瘤大小。
　　結(jié)論：
　　本研究首先應(yīng)用自相關(guān)函數(shù)計算方法及PPI-PK