1、目的：建立家兔腓腸肌失神經(jīng)肌萎縮模型，分離提取肌衛(wèi)星細(xì)胞并移植，觀察移植后延緩骨骼肌萎縮的效果。
　　方法：⑴家兔骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離提取與培養(yǎng)：選取出生后1周內(nèi)的乳兔，取下四肢骨骼肌，經(jīng)膠原酶和胰酶混合液消化，再經(jīng)兩次差速貼壁得到原代肌衛(wèi)星細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)觀察以備移植。⑵動物分組與建模：選用健康家兔35只，雌雄不限，體重2.0～2.5Kg，隨機(jī)分為正常組（normal）5只、模型組（model）10只、對照組(control)10只

2、、移植組（transplant）10只；正常組不作任何處理，建模移植前完整取下腓腸肌，稱量肌濕重，于肌腹中部切取肌組織塊用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，其余三組均進(jìn)一步分為4周和8周兩個(gè)亞組，無菌條件下在左后肢腘窩處顯露、切斷脛神經(jīng)并將兩斷端縫合固定于深筋膜。⑶肌衛(wèi)星細(xì)胞的標(biāo)記與移植：移植組左側(cè)腓腸肌用CM-DiL標(biāo)記的肌衛(wèi)星細(xì)胞0.5mL肌內(nèi)注射，對照組相同部位注射等體積細(xì)胞培養(yǎng)基。⑷腓腸肌的形態(tài)觀察與肌濕重測量：模型組、對照組、移植組各組分別于移植后

3、第4、8周完整取下雙側(cè)腓腸肌稱量肌濕重，于肌腹中部切取肌組織塊用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。⑸石蠟切片HE染色測量腓腸肌的肌纖維橫截面積。⑹冰凍切片Kamovsky-roots法染色檢測腓腸肌運(yùn)動終板。⑺Western blot檢測Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)。⑻統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)和單因素方差分析數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：①通過混合酶消化法和兩次差速貼壁法分離提取得到圓形透亮的的原代肌衛(wèi)星細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)觀察到長梭形貼壁細(xì)胞，最后觀察到細(xì)胞逐漸融合成多核細(xì)胞。②

4、模型組與正常組比較，4周、8周后，模型組的腓腸肌肌濕重明顯減輕，肌纖維橫截面積明顯減小，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在4周時(shí)，兩組的運(yùn)動終板形態(tài)變化不明顯，均呈褐色分布，輪廓清晰可見，至8周時(shí)，正常組的運(yùn)動終板仍出現(xiàn)褐色分布，而模型組運(yùn)動終板形態(tài)已經(jīng)基本消失，細(xì)胞溶解現(xiàn)象明顯。③對照組與模型組比較，兩組在4周、8周時(shí)，肌濕重、肌纖維橫截面積以及Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)均未出現(xiàn)明顯差異（P>0.05），同時(shí)兩組的運(yùn)動終板的形態(tài)變

5、化相同，4周時(shí)，均呈褐色，邊緣清晰，8周時(shí)，運(yùn)動終板消失，細(xì)胞溶解現(xiàn)象明顯。④移植組與模型組比較，4周、8周后，移植組的肌濕重和肌纖維橫截面積下降較小， Bcl-2蛋白表達(dá)量升高和Bax表達(dá)量降低（P<0.05）；運(yùn)動終板在4周時(shí)，變化不明顯，均觀察到褐色分布，8周時(shí)，模型組運(yùn)動終板消失，移植組仍可觀察到運(yùn)動終板，但邊緣已經(jīng)模糊。⑤4周、8周時(shí)熒光顯微鏡下可以清晰觀察到移植組有標(biāo)記的肌衛(wèi)星細(xì)胞，但隨著時(shí)間延長，熒光強(qiáng)度減弱，熒光數(shù)量減少