1、熱激蛋白70是熱休克蛋白家族中最重要的一類家族成員，在應(yīng)激條件下大量表達(dá)。它具有“分子伴侶”、細(xì)胞保護(hù)、抗凋亡以及腫瘤免疫治療等獨(dú)特復(fù)雜的生物學(xué)功能，因此，它的研究已成為生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。目前熱激蛋白70的研究所涉及的物種廣泛，而對于兩棲動(dòng)物，尤其是有關(guān)不同氣候類型兩棲動(dòng)物HSP70的研究比較少。全球性的兩棲動(dòng)物種群數(shù)量銳減已經(jīng)得到科學(xué)界證實(shí)和重視，并且認(rèn)為全球氣候變暖是導(dǎo)致兩棲動(dòng)物銳減其中重要原因之一。兩棲動(dòng)物的特殊生物特性

2、決定它們與環(huán)境之間的關(guān)系是最為密切的，而這種密切的關(guān)系可能與依賴熱激蛋白70來實(shí)現(xiàn)有關(guān)，本文主要以采自昆明地區(qū)的黑斑蛙，西雙版納地區(qū)澤蛙，麗江地區(qū)雙團(tuán)棘胸蛙為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。通過不同熱馴化蛙類器官中的HSP70的Western blotting法測分析，研究不同器官的HSP70在時(shí)間和溫度上的誘導(dǎo)表達(dá)變化以及HSP70作為生物標(biāo)志物的可行性。探討三個(gè)不同類型蛙類在相同馴化條件中熱激蛋白70表達(dá)變化。初步了解氣候變暖對三種不同氣候類型蛙類影響。

3、
　　 本研究方法如下：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組a、正常對照組；b、熱馴化條件組，分為3個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、9h)和5個(gè)溫度梯度(15℃，20℃，25℃，30℃，35℃)。應(yīng)用Western blotting法測定蛙類肝臟、心臟、腦、皮膚、肌肉、脾臟器官HSP70的含量。
　　 實(shí)驗(yàn)一，昆明地區(qū)黑斑蛙在沒有熱馴化條件下，各器官的HSP70表達(dá)量多少排列：肝臟>皮膚>腦>心臟>肌肉>脾臟。結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選擇了肝臟、皮膚、腦、心

4、臟的HSP70表達(dá)量作為持續(xù)熱應(yīng)激的檢測對象。
　　 實(shí)驗(yàn)二.三個(gè)地區(qū)蛙類各器官的HSP70表達(dá)差異表明，不同組織中HSP70有顯著的誘導(dǎo)表達(dá)，表現(xiàn)出一定程度的波動(dòng)性和規(guī)律性。
　　 麗江地區(qū)雙團(tuán)棘胸蛙馴化后結(jié)果顯示，高溫(35℃)對肝臟、腦、皮膚HSP70的誘導(dǎo)表達(dá)與25℃對照組相比有十分顯著的作用(p<0.01)。低溫15℃對肝臟、心臟、腦、皮膚的誘導(dǎo)表達(dá)與25℃對照組相比也有顯著作用(p<0.01)。不同組織表達(dá)高

5、峰在不同溫度的不同馴化時(shí)間，其中肝臟和心臟的HSP70在35℃9h中有最高表達(dá)，分別是25℃馴化平均值的2.94倍和1.26倍；腦組織在15℃9h中有最高表達(dá)，是25℃馴化平均值的1.99倍；皮膚組織在30℃3h中有最高表達(dá)，是25℃馴化平均值的1.42倍。
　　 西雙版納澤蛙馴化后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的t檢驗(yàn)分析結(jié)果表明，高溫(35℃)肝臟、心臟誘導(dǎo)表達(dá)有顯著作用(p<0.01)。低溫(15℃)對肝臟、心臟、腦、皮膚誘導(dǎo)表達(dá)也有顯著作用(

6、p<0.01)。不同組織表達(dá)高峰在不同溫度的不同馴化時(shí)間，其中肝臟、腦和皮膚組織的HSP70在15℃9h中有最高表達(dá)，分別是25℃馴化平均值的4.19倍、1，80倍和1.70倍；心臟組織在15℃3h中有最高表達(dá)，是25℃馴化平均值的1.85倍。
　　 昆明地區(qū)黑斑蛙馴化后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的t檢驗(yàn)分析結(jié)果表明，高溫(35℃)對腦、皮膚在不同時(shí)間誘導(dǎo)表達(dá)有顯著作用(p<0.01)。低溫(15℃)對肝臟、心臟、腦、皮膚不同時(shí)間誘導(dǎo)表達(dá)有顯著作

7、用(p<0.01)。不同組織表達(dá)高峰在不同溫度的不同馴化時(shí)間，其中肝臟在15℃6h中有最高表達(dá)，是25℃馴化平均值的2.88倍；心臟組織在15℃3h中有最高表達(dá)，是25℃馴化平均值的2.69倍；腦和皮膚組織的HSP70在15℃9h中有最高表達(dá)，分別是25℃馴化平均值的1.41倍和2.15。
　　 綜上所述，Western blotting檢測結(jié)果進(jìn)一步證明HSP70有熱表達(dá)的特異性，該表達(dá)方式說明HSP70在蛙類熱損傷保護(hù)中起著