1、目的：通過(guò)觀察球形脂聯(lián)素（globular adiponectin, gAd）對(duì)2型糖尿?。═2DM）大鼠心肌細(xì)胞凋亡和心肌組織中TGF-β1/smads信號(hào)通路的影響，探究gAd對(duì)糖尿病心肌病變的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。
　　方法：30只SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機(jī)分為普通對(duì)照組（NC組，n=8），造模組（n=22）。NC組給予一般飼料喂養(yǎng)，造模組飼以高脂高糖料。8周后，禁食12小時(shí)，造模組予以一次性3

2、0mg/kg的小劑量STZ腹腔注射，NC組予以同等劑量的枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射。72小時(shí)后血糖儀測(cè)尾靜脈隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L,且出現(xiàn)多尿、多飲、多食、精神萎靡等現(xiàn)象即T2DM造模成功。繼續(xù)原飼料喂養(yǎng)大鼠12周，12周末檢測(cè)大鼠尾靜脈血糖，去除死亡及血糖恢復(fù)的大鼠，最終19只大鼠成為DCM模型。DCM模型組大鼠隨機(jī)分為gAd干預(yù)組（DA組，n=10），糖尿病心肌病組（DCM組，n=9）。DA組大鼠每日腹腔注射gAd10ug/kg

3、，DCM組和NC組大鼠每日腹腔注射同等劑量生理鹽水。藥物干預(yù)8周末，各組分別取8只大鼠進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。心臟超聲評(píng)價(jià)大鼠心功能，腹主動(dòng)脈采血檢測(cè)相關(guān)生化指標(biāo)，稱心臟重量計(jì)算大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)，心尖相同部位取心肌，TUNEL染色觀察心肌細(xì)胞凋亡，HE染色觀察心肌組織大體形態(tài)，免疫組化法測(cè)定相關(guān)指標(biāo)蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法測(cè)定心肌組織中 smad3、smad7、TGF-β1mRNA含量，蛋白免疫印跡（Western b

4、lot）法檢測(cè)心肌組織中smad3、smad7、TGF-β1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴大鼠空腹血糖結(jié)果顯示：DCM組血糖值（23.58±2.74）較NC組（4.61±0.66）增高（P<0.05），DA組血糖值（19.48±1.49）較DCM組（23.58±2.74）有所下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；⑵心臟質(zhì)量指數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：DCM組（3.20±0.21)較NC(2.56±0.22）組增高（P<0.05），DA組（2.

5、82±0.39）較DCM組減?。≒<0.05）。⑶心功能：與NC組相比DCM組大鼠心功能明顯下降，gAd干預(yù)后，DA組大鼠心功能好轉(zhuǎn)；⑷TUNEL染色結(jié)果顯示：DCM組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)較 NC組高（P<0.05），DA組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)較DCM組減?。≒<0.05）；⑸HE染色觀察心肌組織形態(tài)：光鏡下可見NC組大鼠心肌細(xì)胞形態(tài)正常，胞核排列整齊；DCM組大鼠細(xì)胞大小不一，形態(tài)紊亂，核成多形性，細(xì)胞間質(zhì)增多，心肌細(xì)胞有斷裂現(xiàn)象；D

6、A組大鼠心肌細(xì)胞有病態(tài)改變，但較DCM組減輕；⑹相關(guān)指標(biāo)免疫組化分析結(jié)果：Ⅰ型膠原蛋白在NC組心肌細(xì)胞間質(zhì)中未見明顯表達(dá)，在DCM組心肌間質(zhì)中表達(dá)較多，呈條索狀，在DA組心肌間質(zhì)中表達(dá)較DCM組減少，成散在分布表達(dá)。平均灰度值為NC組（183.67±9.50）vs DCM組（164.00±4.00）（P<0.05），DCM組（164.00±4.00） vs DA組（176.14±7.34）（P<0.05）。TGF-β1在NC組細(xì)胞胞漿中

7、分布很少，胞漿淡染，未見明顯表達(dá)；在DCM組胞漿中分布廣泛，呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；在DA組胞漿中染色較淡，呈弱陽(yáng)性表達(dá)。平均灰度值為NC組（210.00±6.20) vs DCM組(182.80±5.63)（P<0.05），DCM組(182.80±5.63)vs DA組（200.50±4.51）（P<0.05）。Smad3在NC組細(xì)胞中表達(dá)較少，在DCM組細(xì)胞中呈現(xiàn)片狀強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在DA組細(xì)胞胞漿中弱陽(yáng)性表達(dá)；平均灰度值為NC組（205.33±

8、4.73) vs DCM組(190.25±6.34)（P<0.05）， DCM組(190.25±6.34) vs DA組（199.83±4.62）（P<0.05）。Smad7在NC組細(xì)胞胞漿中呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在DCM組細(xì)胞中少量表達(dá)，在DA組細(xì)胞中表達(dá)較DCM組增多，但較NC組弱。平均灰度值為NC組（182.60±11.39) vs DCM組(207.40±3.13）（P<0.05），DCM組(207.40±3.13）vs DA組（18

9、8.75±8.54）（P<0.05）。⑺RT-PCR結(jié)果顯示：心肌組織中TGF-β1、smad3mRNA含量與NC組相比，DCM組含量增多（P<0.05），gAd干預(yù)8周后，DA組含量較DCM組減少（P<0.05）。Smad7mRNA含量DCM組較NC組減少（P<0.05），藥物干預(yù)8周后，DA組含量較DCM組增多（P<0.05）。⑻Western blot結(jié)果顯示：心肌組織中TGF-β1和smad3蛋白含量在DCM組均較NC組表達(dá)增加