1、β-葡萄糖苷酶是纖維素酶系中的一種，是纖維素降解的限速酶。因此，通過(guò)構(gòu)建基因工程菌以促進(jìn)β-葡萄糖苷酶的表達(dá)，是實(shí)現(xiàn)纖維素高效降解的有用途徑。 構(gòu)建未培養(yǎng)細(xì)菌的宏基因組文庫(kù)是新興的篩選新型基因的有效方法。在本研究中，采用β-葡萄糖苷酶活性篩選策略，從未培養(yǎng)堿性污染物宏基因組AL01文庫(kù)中篩選到3個(gè)編號(hào)分別為pGXAG142、pGXAG313和pGXAG805的陽(yáng)性克隆。對(duì)它們進(jìn)行DNA測(cè)序后進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示，這3個(gè)

2、克隆的外源片段分別包含有783 bp、510bp和1443bp的ORF，分別編碼281、170、481個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，pI/Mw分別為4.88/29079.25kDa、6.28/18513.32 kDa、5.16/57383.4 kDa。BLAST軟件分析這3個(gè)基因與現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)中的β-葡萄糖苷酶基因沒(méi)有任何DNA或者氨基酸水平的同源性，可能是新型的β-葡萄糖苷酶編碼基因。PCR擴(kuò)增這3個(gè)基因的ORF后將它們分別亞克隆到表達(dá)載體pE

3、TBlue-2上，然后轉(zhuǎn)化至EColi Rosetta(DE3)plysS，平板酶活檢測(cè)顯示它們?nèi)阅芙到獾孜?，說(shuō)明均攜帶了正確的讀碼框架。 以大腸桿菌表達(dá)菌株pGXAG142G/Rosetta(DE3)plysS的表達(dá)蛋白Bglg142為主要研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)的初步研究，發(fā)現(xiàn)該酶的最適pH為5.5-8.0，最佳作用溫度為50℃，Km值為0.238 mmol/L，Vmax為10.6 U/min，最適條件下酶活為 24.8