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![Il-6基因的表達(dá)及其多態(tài)性與變應(yīng)性鼻炎的相關(guān)性研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/f49aa654-8ed0-4f01-a837-7eaeef9075c1/f49aa654-8ed0-4f01-a837-7eaeef9075c11.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
目前已有多個(gè)研究發(fā)現(xiàn),白介素6(IL-6)基因多態(tài)性是多種免疫相關(guān)疾病的易感基因。最近的研究顯示,在過(guò)敏性呼吸系統(tǒng)疾病中,IL-6擔(dān)當(dāng)重要角色。有關(guān)數(shù)據(jù)顯示,IL-6的表達(dá)同變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病之間存在一定的關(guān)系,本研究通過(guò)三部分實(shí)驗(yàn)來(lái)探討IL-6基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群變應(yīng)性鼻炎易感性之間是否相關(guān)性。
方法:
(1)采用HE染色和免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)45例變應(yīng)性鼻炎患者下鼻甲組織、15例鼻中隔偏曲患
2、者下鼻甲組織(對(duì)照組)的病理組織學(xué)變化以及IL-6的表達(dá)。
(2)收集265例變應(yīng)性鼻炎患者的外周靜脈血及265例對(duì)照組的外周靜脈血樣本,對(duì)兩組樣本進(jìn)行病例對(duì)照研究。提取血液樣本中的DNA,并對(duì)DNA樣本中IL-6基因的兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)(rs1800795和rs1800796)進(jìn)行基因分型,探討IL-6的基因多態(tài)性與變應(yīng)性鼻炎易感性的關(guān)系?;蚍中筒扇CR-RFLP和直接測(cè)序的法。
(3)利用Balb/c小鼠建立卵清蛋
3、白致敏的變應(yīng)性小鼠模型,按末次激發(fā)后處死時(shí)間分為6組(30min、1h、2h、6h、12h、24h),同時(shí)使用生理鹽水作為對(duì)照組,每組各5只小鼠。取各組小鼠鼻黏膜組織,利用HE染色法檢測(cè)各組小鼠鼻黏膜組織的病理組織學(xué)變化情況,western blot法檢測(cè)IL-6在各組小鼠鼻黏膜組織中的表達(dá)情況。
結(jié)果:
(1)HE染色結(jié)果表明,變應(yīng)性鼻炎患者的鼻黏膜上皮組織發(fā)生部分脫落,視野下能夠見(jiàn)到杯狀細(xì)胞增生,組織存在水腫現(xiàn)象
4、,腺體增生,血管擴(kuò)張,在上皮組織間可見(jiàn)到醫(yī)以嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主的大量炎細(xì)胞浸潤(rùn),其中還包括嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等。對(duì)兩組組織切片中嗜酸性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),結(jié)果表明變應(yīng)性鼻炎組嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)顯著,為(31.92±2.95),正常對(duì)照組為(3.83±2.03),變應(yīng)性鼻炎組明顯高于正常對(duì)照組,兩者相比差異顯著(P=0.001<0.05); western blot檢測(cè)結(jié)果表明,IL-6蛋白在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中的相對(duì)表達(dá)量為
5、(0.40±0.16),而在正常對(duì)照組下鼻甲組織中的相對(duì)表達(dá)量為(0.26±0.14),變應(yīng)性鼻炎組明顯高于正常對(duì)照組(P=0.003<0.05)。
(2)對(duì)IL-6基因多態(tài)性進(jìn)行分析,結(jié)果表明IL-6 rs1800795等位基因頻率在變應(yīng)性鼻炎患者與對(duì)照組中存在顯著差異(x2=4.52,P=0.03);多因素logistic回歸分析表明,相較于G等位基因,IL-6 rs1800795的C等位基因具有更高的變應(yīng)性鼻炎發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),
6、OR值為1.31(1.01~1.68)。
(3)動(dòng)物行為學(xué)觀察結(jié)果表明,變應(yīng)性鼻炎小鼠模型造模成功;HE染色結(jié)果表明,各變應(yīng)性鼻炎模型組小鼠的鼻腔黏膜上皮均出現(xiàn)不同程度的結(jié)構(gòu)紊亂,同時(shí)還可見(jiàn)充血、水腫以及黏膜層增厚等現(xiàn)象,此外還伴有黏膜上皮組織壞死以及脫落等,纖毛上皮可見(jiàn)有融合現(xiàn)象出現(xiàn),細(xì)胞核發(fā)生形變,形狀不規(guī)則,柱狀細(xì)胞以及杯狀細(xì)胞增生,血管擴(kuò)張并增生,大量肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。Western
7、blot檢測(cè)結(jié)果表明,各組小鼠鼻黏膜組織中均有IL-6蛋白的表達(dá),其中在30 min組中的相對(duì)表達(dá)量為0.142±0.064,在1h組中的相對(duì)表達(dá)量為0.214±0.104,在2h組中相對(duì)表達(dá)量為0.274±0.092,在6h組中的相對(duì)表達(dá)量為0.324±0.122,然后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸下降趨勢(shì),在12h組中的相對(duì)表達(dá)量為0.236±0.059,在24h組中的表達(dá)量為0.172±0.058。與對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量0.068±0.020
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