1、目的：明確載脂蛋白M（apolipoprotein M，apoM）在外周血細(xì)胞表面的表達(dá)情況，探討apoM在炎癥中的作用及可能機(jī)制。
　　方法：采集健康成年志愿者新鮮全血，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離后，CD3、CD19、CD14、CD56和CD16抗體分別標(biāo)記T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞，用藻紅蛋白（P-phycoerythrin，PE）標(biāo)記apoM，流式細(xì)胞儀及激光共聚焦分別檢測(cè)不同細(xì)胞亞群上apoM蛋白的表達(dá)情況。
　　

2、以人單核細(xì)胞THP-1細(xì)胞為研究對(duì)象，體外構(gòu)建巨噬細(xì)胞炎癥模型。實(shí)驗(yàn)分組：（1）對(duì)照組；（2）10μg/ml人重組apoM蛋白單獨(dú)預(yù)處理3h；（3）10μg/ml人重組apoM蛋白預(yù)處理細(xì)胞3h，10ng/ml脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）孵育6h；（4）10ng/mlLPS孵育6h。雙重?zé)晒舛縋CR法（dual fluorescent quantitative real-time PCR）檢測(cè)腫瘤壞死因子（T

3、umor necrosis factor-α，TNF-α）和白介素1β（Interleukin1 beta，IL-1β）的mRNA水平。
　　用1-磷酸鞘氨醇受體2（Sphingosine1 Phosphatereceptor2，S1P2）拮抗劑JTE-013（30μM）、激動(dòng)劑CYM-5520（1μM、10μM、50μM）和S1P1、S1P3、S1P4、S1P5激動(dòng)劑FTY720（10μM）分別預(yù)處理巨噬細(xì)胞0.5h，再用人重組

4、apoM蛋白孵育9h，采用雙重?zé)晒舛縋CR法檢測(cè)TNF-α和IL-1β的mRNA水平。
　　結(jié)果：激光共聚焦結(jié)果顯示，T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞表面均表達(dá)apoM蛋白。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示，apoM在CD14+單核細(xì)胞上表達(dá)的比例最高，達(dá)到14.4％，其次為CD3+T細(xì)胞，表達(dá)比例為7.4％，CD19+B細(xì)胞、CD56+NK細(xì)胞和CD16+NK細(xì)胞表達(dá)apoM的比例分別為6.2％、2.4％和4.2％。
　　LPS刺

5、激巨噬細(xì)胞可顯著上調(diào)TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)水平，人重組apoM蛋白和LPS共同處理組TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)水平與LPS單獨(dú)刺激組相比分別升高1.15和1.21倍（P值分別為0.0383和0.0034）。
　　在體外，apoM重組蛋白單獨(dú)作用可顯著上調(diào)巨噬細(xì)胞中TNF-α和IL-1β的mRNA的表達(dá)（分別升高2.09倍和1.35倍，P值為0.0007和0.0026）。JTE-013和apoM重組蛋白共同處

6、理組與單獨(dú)apoM重組蛋白處理組相比，TNF-α和IL-1β的mRNA水平升高1.86和1.65倍（P值均小于0.0001），CYM-5520和apoM重組蛋白共同處理組與apoM單獨(dú)處理組相比，TNF-α和 IL-1β的表達(dá)顯著降低（分別降低1.41和1.24倍，P值為0.0406和0.0275）。雙因素方差分析顯示apoM和JTE-013對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)水平的交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FTY7

7、20和apoM重組蛋白共同作用也能顯著抑制巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)（分別降低1.48和1.6倍，P值均小于0.0001），但雙因素方差分析顯示apoM和FTY720對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)水平的交互作用沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞中，T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞都表達(dá)apoM蛋白，單核細(xì)胞表達(dá)量最高。人重組apoM蛋白能夠促進(jìn)LPS介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞TN