1、目的:
　　1.從骨髓微環(huán)境的改變來探討激素性股骨頭壞死（腎虛血瘀型）可能的發(fā)病機制。檢測激素性股骨頭壞死股骨近端髓腔內(nèi)骨髓間充質(zhì)干細胞的Runx2、catenin、LRP5、OSX、PPARγ、OCN、TAZ、LEF-1 mRNA相對于健康者的表達差異，初步探討Wnt/β-catenin信號通路在激素性股骨頭壞死（腎虛血瘀型）中的表達意義，為臨床治療方案提供參考。
　　2.收集非創(chuàng)傷性股骨頭壞死患者和股骨頸骨折行關(guān)節(jié)置換者

2、新鮮股骨頭標本，研究患髖疼痛時間與軟骨狀態(tài)關(guān)系，并對激素性壞死股骨頭標本進行micro-CT掃描檢測不同部位的BMD和BMC等差異，觀察研究壞死股骨頭內(nèi)不同病理區(qū)病理結(jié)構(gòu)差異。
　　3.回顧性研究資料完整的非創(chuàng)傷性ARCOⅡ期股骨頭壞死的影像學(xué)自然進展，研究股骨頭壞死負重區(qū)的保留與塌陷進展之間的關(guān)系，以期為股骨頭壞死患者的預(yù)后及制定合理的個體化治療方案提供參考依據(jù)。
　　方法:
　　1.從2015年11月至2016年2

3、月，從我院6例因激素性股骨頭壞死行保髖手術(shù)或關(guān)節(jié)置換術(shù)（實驗組）和5例因股骨頸骨折、髖臼發(fā)育不良繼發(fā)髖關(guān)節(jié)炎或髖關(guān)節(jié)炎需手術(shù)患者（對照組）術(shù)中從股骨近端抽取骨髓。每位患者術(shù)前均簽署知情同意書。記錄納入研究者術(shù)前各項檢查資料。分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，對其表型進行流式鑒定，油紅0染色鑒定成脂能力，茜素紅染色鑒定成骨能力。將細胞培養(yǎng)至第3代，RT-qPCR檢測各組骨髓間充質(zhì)干細胞中Runx2、OSX、LRP5、catenin、PPARγ、O

4、CN、TAZ、LEF-1的mRNA表達差異。
　　2.從2015年3月至2016年2月，收集我院非創(chuàng)傷性股骨頭壞死及新鮮股骨頸骨折患者行髖關(guān)節(jié)置換術(shù)的影像學(xué)檢查資料及病歷資料，收集剛手術(shù)截取的新鮮股骨頭標本，對標本外觀分別從前、后、內(nèi)、外方向拍照，記錄患者患髖發(fā)病以來疼痛時間、程度，觀察股骨頭標本的外形、軟骨色澤、表面形態(tài)、彈性及厚度等。取6例X線、CT、MRI資料齊全的新鮮的激素性股骨頭壞死股骨頭標本用硬組織切片機沿股骨頭冠狀面

5、負重區(qū)為中心以5～8mm的間距切開，觀察剖面內(nèi)各病理區(qū)形態(tài)，選接近正中冠狀位層面行Micro-CT掃描檢測，并選取壞死區(qū)、硬化帶、正常區(qū)進行三維重建后行骨礦密度(BMD)、骨礦容量(BMC)、組織體積(TV)、骨體積(BV)、骨體積分數(shù)(BVF，BV/TV)、骨表面積與骨體積比(BS/BV)、骨表面密度(BS/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)、骨小梁分離度(Tb.Sp)等相關(guān)參數(shù)分析，其余層面按照負重區(qū)軟骨、壞死

6、區(qū)、硬化區(qū)及正常區(qū)分別取材行HE染色、masson染色及其它相關(guān)檢測分析，與股骨頸骨折組相對照，比較空骨陷窩率、軟骨細胞數(shù)、最大脂肪細胞直徑等。
　　3.回顧性分析2009年1月至2015年3月期間于我院骨科住院治療的87位（102髖）影像資料完整的經(jīng)MRI診斷為ARCOⅡ期的非創(chuàng)傷性股骨頭壞死患者的影像學(xué)自然進展。記錄雙髖關(guān)節(jié)正位和蛙式側(cè)位X片上發(fā)生塌陷的髖數(shù)及發(fā)展至塌陷的時間。按照壞死區(qū)所在股骨頭前外側(cè)部位提出蛙式側(cè)位(FLL

7、)分型。將蛙式側(cè)位股骨頭內(nèi)的壞死區(qū)描述為后中和中心部位（Ⅰ型），部分前外側(cè)（Ⅱ型）和整個前外側(cè)部（Ⅲ型），分別占股骨頭直徑的25％、50％和25％。觀察壞死塌陷與股骨頭前外側(cè)部負重區(qū)骨量保留情況關(guān)系，并通過對術(shù)后切下的股骨頭的形態(tài)分析進行證實。對股骨頭蛙式側(cè)位不同分型的股骨頭塌陷率和塌陷時間進行總結(jié)分析并與傳統(tǒng)的正位分型相比較。
　　結(jié)果:
　　1.提取骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗組與對照組相比較，術(shù)前實驗組血液分析中平均紅細胞體

8、積(MCV)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、紅細胞分布寬度（RDW-CV）均高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);實驗組血液生化分析中總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、載脂蛋白A1（apoA1）、載脂蛋白B(apoB)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)均低于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。按照患者臨床癥狀和體征所見，結(jié)合股骨頭壞死中醫(yī)臨床路徑診療規(guī)范，可

9、將激素性股骨頭壞死按腎虛血瘀型辯證論治。
　　2.成功分離培養(yǎng)了骨髓間充質(zhì)干細胞，并經(jīng)過細胞表型鑒定CD29、CD44、CD73、CD105陽性，CD34、CD45陰性，符合骨髓間充質(zhì)干細胞表型。油紅O染色、茜素紅染色鑒定了其潛在的成脂、成骨分化能力。
　　3.RT-qPCR結(jié)果表明，實驗組（ONFH組）骨髓間充質(zhì)干細胞的Runx2、OSX、LRP5、catenin的mRNA表達量明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

10、5);實驗組PPARγ、OCN、TAZ、LEF-1低于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.Micro-CT掃描影像可見壞死區(qū)骨小梁明顯較稀疏，部分可見斷裂，壞死區(qū)與硬化區(qū)之間存在明顯的空隙（大體標本上對應(yīng)為肉芽帶），部分有囊變。對壞死區(qū)、硬化區(qū)與正常區(qū)進行三維重建后相關(guān)數(shù)據(jù)分析表明，與正常區(qū)相比較，壞死區(qū)的BMD、BMC、BVF、Tb.N明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05); Tb.Sp明顯升高，差異有統(tǒng)計

11、學(xué)意義（P＜0.05）。硬化區(qū)的BMD、BMC、BVF、Tb.Th明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;BS/BV明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與正常區(qū)相比較，壞死區(qū)BS/BV、BS/TV較正常區(qū)高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05); Tb.Th較正常區(qū)低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與正常區(qū)相比較，硬化區(qū)BS/TV較高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，Tb.Sp較低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)

12、。
　　統(tǒng)計結(jié)果表明患者患髖疼痛時間越長，一般股骨頭軟骨損傷程度越重。一般疼痛時間不超過6月者，股骨頭軟骨多較完好，建議保髖手術(shù)在患髖疼痛不超過6個月進行為宜。HE染色及masson染色觀察結(jié)果顯示，實驗組負重區(qū)軟骨細胞數(shù)明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;壞死區(qū)空骨陷窩率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);實驗組最大脂肪直徑明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。實驗組膠原纖維、類骨質(zhì)定性分

13、析均低于對照組。
　　5.回顧性分析研究ARCOⅡ期非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的X片影像學(xué)自然進展結(jié)果表明，與正位X片相比較，蛙式側(cè)位X片股骨頭塌陷的數(shù)量明顯高于正位X片的塌陷數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01）。蛙式側(cè)位X片塌陷時間小于正位X片塌陷時間，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。按照股骨頭壞死區(qū)蛙式側(cè)位分型，Ⅲ型股骨頭壞死的塌陷率明顯高于Ⅱ型股骨頭壞死，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。Ⅲ型股骨頭壞死發(fā)展至塌陷時間比Ⅱ型較短

14、，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。對手術(shù)切除的壞死股骨頭標本進行組織病理學(xué)分析證實塌陷區(qū)位于股骨頭前外側(cè)部。
　　結(jié)論:
　　1.塌陷期激素性股骨頭壞死患者股骨近端骨髓內(nèi)Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路可能受到抑制，導(dǎo)致股骨頭內(nèi)成骨能力下降，破骨細胞對骨細胞再吸收的速度高于成骨細胞生成新骨的速度，修復(fù)能力變?nèi)?，修?fù)反應(yīng)引起骨強度降低，負重區(qū)承重能力下降。
　　2.非創(chuàng)傷性股骨頭壞死壞死區(qū)的BMD、BMC、BV

15、F、Tb.N較正常區(qū)明顯減少，Tb.Sp明顯增加。壞死后其內(nèi)部空間排列以及立體結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致力學(xué)強度減弱，負重區(qū)承重能力下降，應(yīng)力集中的結(jié)果，骨小梁發(fā)生微骨折。股骨頭內(nèi)生物學(xué)、生物力學(xué)的共同改變，最終導(dǎo)致股骨頭部分塌陷。
　　3.股骨頭壞死前外側(cè)部的保留與塌陷進展有關(guān)。壞死區(qū)蛙式側(cè)位分級有助于減少塌陷的漏診率，為預(yù)測股骨頭壞死塌陷的可能性和選擇適當?shù)闹委煼桨柑峁﹨⒖肌Ｔ谕芪籜片上，當壞死區(qū)累及前股骨頭前外側(cè)部時，塌陷風險較大，建議