1、口服特異性卵黃免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin，IgY)可治療由細(xì)菌或病毒引起的腸道疾病，具有安全無殘留、不產(chǎn)生抗藥性、服用簡便等優(yōu)點，是一種具有廣闊應(yīng)用前景的抗生素替代品。但IgY在高強度的胃酸環(huán)境中易被胃蛋白酶降解，失去抗體活性。因此，如何避免IgY在胃中失活，而在小腸中穩(wěn)定地發(fā)揮作用，是一個亟待解決的問題。針對這一問題，本論文采用微囊化技術(shù)包埋IgY，制備口服型IgY-殼聚糖-海藻酸鈉微囊，從體外、體內(nèi)兩

2、方面評價殼聚糖.海藻酸鈉微囊作為IgY口服載體的可行性。 本研究以引起仔豬腹瀉的最主要致病菌--產(chǎn)腸毒素大腸桿菌K88為抗原，免疫蛋雞后獲得特異性IgY。通過對獲得高效價特異性IgY的最佳抗原濃度研究發(fā)現(xiàn)，K88菌毛蛋白對蛋雞的免疫原性優(yōu)于全菌；純化的菌毛蛋白對蛋雞的免疫原性優(yōu)于粗菌毛蛋白，其誘導(dǎo)的抗體效價最高可達(dá)1:480000；確定菌毛蛋白的最佳濃度為2 mg/ml，全菌的最佳濃度為1010 mg/ml。 通過對

3、IgY的分離純化條件研究發(fā)現(xiàn)，鹽析法提取IgY的最佳條件是將粗提的IgY經(jīng)50％飽和度的硫酸銨鹽析一次，再經(jīng)14％(w/v)硫酸鈉鹽析一次，獲得的IgY回收率可達(dá)46％，純度可達(dá)77％；經(jīng)超濾(100 kDa)后，最終獲得的IgY凍干粉純度為82％。 對IgY穩(wěn)定性的研究結(jié)果表明，溫度不超過70℃時，IgY具有良好的熱穩(wěn)定性；pH<3時，IgY活性大部分喪失：IgY對胰蛋白酶有較好的抵抗力，但低pH條件下對胃蛋白酶十分敏感；冷

4、凍干燥處理對IgY活性有不利的影響；-20℃和4℃環(huán)境中，IgY凍干粉具有良好的貯藏穩(wěn)定性。 為保護IgY的口服活性，選用天然材料海藻酸鈉和殼聚糖作為壁材，利用氣體吹噴制囊法，制備IgY-殼聚糖.海藻酸鈉微囊。考察了成囊裝置主要的物理條件對空白殼聚糖.海藻酸鈉微囊粒徑及形態(tài)的影響，確定制備微囊的最佳物理條件為：空氣壓力0.3 m3/h，液面距8 cm，恒流泵速度4 ml/min，攪拌子轉(zhuǎn)速200 r/min。此條件下制備的新鮮

5、微囊球形圓整，平均粒徑約1 mm，且粒徑分布集中。在此基礎(chǔ)上，探討了主要反應(yīng)條件對微囊的載藥量、包封率、保護IgY在模擬胃液中的穩(wěn)定性、以及微囊在體外的釋放行為的影響。確定制備微囊的優(yōu)化條件為：成囊溶液pH 3.5，殼聚糖濃度0.2％(w/v)，CaCl2濃度0.5％(w/v)，海藻酸鈉濃度2％(w/v)，藥載比25％，在此優(yōu)化條件下制備的IgY微囊載藥量高于20％，包封率高于75％，IgY在模擬胃液中2 h累積釋放率小于lO％，而在模

6、擬腸液中4 h累積釋放率大于80％。另外，ELISA和SDS-PAGE結(jié)果顯示，IgY微囊在模擬胃液中可抵抗胃蛋白酶的降解，而且抗體的活性保持在70％以上。 將IgY-殼聚糖.海藻酸鈉微囊用于斷奶仔豬的攻毒治療試驗，結(jié)果表明，腹瀉斷奶仔豬服用IgY微囊后，病情很快得到控制，1 d后所有病豬得到治愈，而且體重增加最快；而未包埋的IgY凍干粉治療效果低于微囊化IgY，3 d后所有病豬得到治愈。而對照組仔豬口服生理鹽水，第1 d有腹