1、目的：通過提取、分離、純化獲得別克參均一多糖，對均一多糖理化性質及一級結構進行初步表征，為別克參藥材物質基礎研究奠定基礎；考察別克參多糖體內、體外免疫調節(jié)及抗炎活性，為該藥材生物活性研究提供理論支持；建立別克參藥材質量控制方法，保證該藥材臨床用藥的安全、有效、可控、穩(wěn)定。
　　方法：①運用響應曲面法及四因素三水平的Box-Behnken中心組合實驗設計方法優(yōu)化別克參多糖成分的熱水提取工藝，通過DEAE Sepharose CL-6

2、B和Sephadex G-100對提取后的粗多糖進行分離純化，采用高效凝膠色譜法分析純化后均一多糖的純度及相對分子質量；②運用苯酚-硫酸法、間羥聯苯法、碘顯色法、柱前衍生-HPLC法測定別克參均一多糖中總糖含量、糖醛酸、淀粉含量及單糖組成；結合紅外、Smith降解、甲基化實驗、部分酸水解及NMR分析初步鑒別均一多糖的結構；③通過小鼠體內碳粒廓清實驗考察別克參粗多糖對免疫低下小鼠非特異性免疫調節(jié)功能；通過二甲苯致小鼠耳腫脹、小鼠棉球肉芽腫

3、及冰醋酸致小鼠扭體實驗考察別克參粗多糖抗炎鎮(zhèn)痛功效；通過測定別克參多糖組分對RAW264.7細胞活性、吞噬能力、分泌細胞因子及介質能力的影響，考察體外免疫調節(jié)能力；通過測定別克參多糖組分對LPS誘導的RAW264.7炎癥細胞分泌炎癥因子及介質的影響，考察體外抗炎能力；④藥材質量標準研究：分析10批別克參藥材中水分、灰分；建立微波消解ICP-MS法測定別克參中微量元素、重金屬含量的方法；建立乙腈超聲萃取、GC-MS法分析別克參藥材中農藥殘

4、留的方法；建立別克參藥材中氨基酸成分、多糖成分的薄層鑒別方法；建立柱前衍生-HPLC法測定藥材中多糖含量的方法。
　　結果：①響應曲面法優(yōu)化后的別克參粗多糖提取工藝為：提取時間4.28 h，提取溫度90℃，料液比37 ml/g，提取次數3次。驗證試驗所得產率（37.25％±0.17%）與回歸模型預測值37.465%吻合。別克參粗多糖經DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-100分離純化后，得4個均一多糖（

5、ESBP1-1、ESBP1-2、ESBP2-1、ESBP3-1），高效凝膠色譜法表明分子量分別為1.3×104、1.7×104、9.4×105、4.1×105 Da。②苯酚-硫酸法結果表明ESBP1-1、ESBP1-2、ESBP2-1、ESBP3-1總糖含量分別為97.8%、98.7%、99.3%、97.0%；間羥聯苯法結果表明ESBP2-1、ESBP3-1糖醛酸含量分別為0.02%、1.9%，ESBP1-1、ESBP1-2中不含糖醛酸

6、；碘顯色法結果表明ESBP1-1、ESBP1-2含淀粉分別為0.5%、0.3%，ESBP2-1、ESBP3-1中未檢出淀粉；柱前衍生-HPLC法結果表明ESBP1-1、ESBP1-2均由葡萄糖組成，ESBP2-1主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖組成（摩爾比24.3∶1.1∶1），ESBP3-1主要由葡萄糖和半乳糖組成（摩爾比14.8∶1）；紅外、Smith降解、甲基化實驗、部分酸水解及NMR分析結果表明別克參4種均一多糖的結構具有共性，4

7、種均一多糖主鏈均由(1→4)-α-D-Glcp構成，均從6-O位上分支出側鏈，4種均一多糖側鏈結構存在不同。③小鼠體內碳粒廓清實驗表明別克參粗多糖具有提高免疫抑制小鼠臟器指數及單核巨噬細胞廓清指數的能力，提示別克參多糖具有一定非特異性免疫調節(jié)功能；二甲苯致小鼠耳腫脹、小鼠棉球肉芽腫及冰醋酸致小鼠扭體實驗表明別克參粗多糖具有明顯抑制耳腫脹、降低肉芽質量，減少扭體次數的能力，提示別克參多糖具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛功效；體外細胞實驗表明，別克參粗多糖

8、ESBP及均一多糖ESBP1-1、ESBP1-2、ESBP2-1及ESBP3-1能促進RAW264.7細胞增殖，提高其吞噬活力，上調NO、IL-1β及TNF-α的釋放，顯現免疫增強作用；LPS誘導的RAW264.7細胞炎癥反應實驗表明別克參多糖可抑制由LPS誘導的過度免疫而產生的NO、IL-1β、TNF-α的分泌，顯現抗炎效果。④質量控制方法研究：建立了別克參藥材中微量金屬元素、農藥殘留的檢查方法，建立了別克參藥材中氨基酸成分、多糖成分

9、的薄層鑒別方法，建立了藥材中多糖成分的含量測定方法，完成藥材質量標準草案及起草說明的撰寫。
　　結論：①運用響應曲面法提取別克參多糖，建立的模型準確可靠，可以用于別克參多糖的提取工藝；②運用DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-100分離純化別克參粗多糖，方法可行；純化出4種均一多糖，4種均一多糖主鏈結構具有共性；③別克參多糖組分具有增強免疫力的功效，可能與別克參多糖可促進細胞增殖、增強吞噬能力及上調細胞