1、背景:
　　長(zhǎng)期以來，惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。越來越多的研究證實(shí)，遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的異常改變?cè)诎┗蚝鸵职┗虻谋磉_(dá)調(diào)控中起著重要的作用，抑癌基因拷貝數(shù)變異和（或）啟動(dòng)子CpG島甲基化導(dǎo)致的表達(dá)失活與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。因此，通過尋找腫瘤發(fā)生過程中抑癌基因拷貝數(shù)變異和DNA甲基化變化的規(guī)律，將為惡性腫瘤的臨床診斷和靶向治療方式提供新的思路。MPDZ基因是我們前期在肺癌研究中篩選出的一個(gè)新的

2、甲基化調(diào)控候選抑癌基因，但是其在肺癌以及其他腫瘤中的作用和機(jī)制還不清楚，因此本課題擬通過對(duì)MPDZ基因在腫瘤中的臨床特征分析，初步評(píng)價(jià)其在腫瘤發(fā)生中的臨床意義;同時(shí)，全面分析MPDZ基因在腫瘤中的功能和分子機(jī)制，為后續(xù)深入研究該基因在腫瘤發(fā)生中的生物學(xué)意義和有效的腫瘤治療提供資料。
　　目的:
　　1.明確MPDZ基因在腫瘤中的突變、拷貝數(shù)變異和甲基化的發(fā)生情況及其臨床意義;解析MPDZ基因甲基化和表達(dá)對(duì)腫瘤患者生存預(yù)后的影

3、響。
　　2.明確MPDZ基因在肺癌組織、痰液和血漿中的甲基化發(fā)生情況，評(píng)價(jià)MPDZ甲基化檢測(cè)在肺癌診斷中的價(jià)值。
　　3.證實(shí)MPDZ基因?qū)δ[瘤細(xì)胞增殖、周期和凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用;闡明MPDZ發(fā)揮抑癌作用的分子信號(hào)通路。
　　方法:
　　1.利用COSMIC和cBioPortal在線軟件分析MPDZ基因在正常組織中的表達(dá);同時(shí)分析MPDZ基因在腫瘤中突變的發(fā)生情況和突變的主要形式。
　　2.利用TCG

4、A數(shù)據(jù)庫，分析MPDZ基因在肝癌、腎透明細(xì)胞癌(ccRCC)和肺癌中的拷貝數(shù)變異和基因表達(dá)情況及其兩者之間的關(guān)系;Kaplan-Meier方法分析拷貝數(shù)變異和基因表達(dá)對(duì)腫瘤患者生存預(yù)后的影響。
　　3.利用MSP檢測(cè)MPDZ基因在肺癌組織、痰液和血漿中的甲基化發(fā)生情況，同時(shí)結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)庫評(píng)價(jià)MPDZ基因甲基化在肺癌診斷中的潛在生物學(xué)價(jià)值。
　　4.利用qRT-PCR和WB檢測(cè)肺癌細(xì)胞系和HBE細(xì)胞中MPDZ基因的表達(dá)，同

5、時(shí)利用免疫組織化學(xué)方法分析MPDZ蛋白在腫瘤組織和癌旁組織中的表達(dá)，利用Kaplan-Meier方法分析MPDZ蛋白表達(dá)與肺癌患者生存預(yù)后的關(guān)系。
　　5.通過細(xì)胞模型和動(dòng)物模型分析MPDZ基因在腫瘤中的作用功能，利用MTS分析細(xì)胞增殖情況、流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的改變和細(xì)胞凋亡的發(fā)生、Transwell和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)分析腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力、裸鼠移植瘤模型評(píng)價(jià)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)情況。
　　6.利用qRT-PCR、WB、基因轉(zhuǎn)染、

6、RNAi技術(shù)和免疫熒光等多種分子生物學(xué)技術(shù)研究MPDZ在腫瘤中作用的分子機(jī)制，并確定在腫瘤中發(fā)揮作用的主要信號(hào)通路。
　　結(jié)果:
　　1.MPDZ基因在不同器官組織中的表達(dá)存在一定差異，其中在血液系統(tǒng)表達(dá)較低，在神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)較高;且該基因在多數(shù)腫瘤中發(fā)生突變，以彌漫性B細(xì)胞淋巴瘤中突變發(fā)生率最高(16％)。
　　2.MPDZ基因在肝癌和ccRCC中發(fā)生明顯的拷貝數(shù)變異，主要的形式為拷貝數(shù)缺失，且拷貝數(shù)缺失影響該基因的表

7、達(dá);拷貝數(shù)缺失的ccRCC患者的生存時(shí)間顯著短于拷貝數(shù)正常的患者（P＜0.01）。
　　3.MPDZ基因在肺癌中發(fā)生了明顯的甲基化，在腫瘤組織的甲基化檢出率為69.4％，腫瘤組織發(fā)生甲基化的患者，其痰液和血漿的檢出率分別為46.5％和76.7％;MPDZ基因啟動(dòng)子CpG島中存在三個(gè)CG位點(diǎn):cg14655855、cg06202228和cg10899099，且肺癌組織中的甲基化水平顯著高于癌旁組織(P＜0.01);三個(gè)CG位點(diǎn)及其平

8、均值ROC曲線下面積AUC在0.80～0.84之間，95％CI在0.74～0.88之間，是一個(gè)靈敏度和特異度較好的肺癌臨床診斷指標(biāo)。
　　4.MPDZ基因在肺癌組織和多數(shù)肺癌細(xì)胞系中低表達(dá)，且該基因表達(dá)受甲基化的調(diào)控;MPDZ基因表達(dá)與患者的生存期呈負(fù)相關(guān)，且該蛋白表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素。
　　5.MPDZ基因高表達(dá)可以通過促而進(jìn)細(xì)胞凋亡抑制肺癌細(xì)胞的增殖，同時(shí)可以抑制肺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移;而干擾MPDZ表達(dá)后可以促進(jìn)肺癌

9、細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　6.MPDZ基因發(fā)揮抑癌作用依賴于hippo-YAP通路，干擾YAP后，肺癌細(xì)胞的遷移明顯抑制。MPDZ蛋白可以與Hippo通路中的多數(shù)蛋白相互作用;MPDZ基因高表達(dá)后可以抑制YAP基因及其下游靶分子CTGF和CYR61的表達(dá)，而干擾MPDZ表達(dá)后則可以促進(jìn)YAP基因及其下游靶分子CTGF和CYR61的表達(dá);同時(shí)MPDZ基因差異表達(dá)可以影響YAP蛋白的總量。
　　結(jié)論:
　　MPDZ基因

10、在多數(shù)腫瘤中發(fā)生突變，但突變率較低，單純基因突變并不影響腫瘤患者的生存預(yù)后;在肝癌和ccRCC中MPDZ基因拷貝數(shù)缺失影響該基因的表達(dá)以及患者的生存預(yù)后;MPDZ基因在肺癌中發(fā)生明顯的甲基化，且該基因甲基化是一個(gè)較好的肺癌臨床診斷生物標(biāo)志物;MPDZ基因在肺癌中低表達(dá)，其表達(dá)與肺癌患者的生存時(shí)間呈正相關(guān)，是肺癌患者的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素;MPDZ基因抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移;MPDZ基因在腫瘤中發(fā)揮抑癌作用依賴于Hippo-YAP通路