1、為了進(jìn)一步分析小分子添加劑對蛋白質(zhì)活性及結(jié)構(gòu)的影響,本文以溶菌酶為模型蛋白,利用熒光技術(shù)和圓二色技術(shù)對幾種具有代表性的添加劑從活性、結(jié)構(gòu)及機(jī)理上對溶菌酶結(jié)構(gòu)的影響進(jìn)行了對比考察.分析其作用機(jī)制異同點(diǎn)；并基于海藻糖和甜菜堿對保護(hù)蛋白質(zhì)的作用,考察了海藻糖和甜菜堿在不同濃度鹽酸胍和酶濃度條件下對溶菌酶輔助復(fù)性和復(fù)性動力學(xué)特性,分析了它們作用機(jī)理. 結(jié)果表明,與自發(fā)復(fù)性收率(40﹪)相比,復(fù)性液中添加精氨酸、甘油、乙酰胺、丙酮、硫脲

2、、海藻糖和甜菜堿均能有效提高變性溶菌酶的復(fù)性收率.精氨酸和丙酮都能通過與變性溶菌酶的靜態(tài)結(jié)合來輔助溶菌酶復(fù)性,在低鹽酸胍濃度下兩者都可以增加溶菌酶α螺旋的含量,兩者對溶菌酶的結(jié)構(gòu)所起的作用相似.乙酰胺和硫脲則起著和鹽酸胍近似的作用,能夠抑制肽鏈間的聚集和肽鏈內(nèi)的折疊,但是兩者在本實(shí)驗(yàn)濃度內(nèi)不能使溶菌酶變性.甘油則可以使得溶菌酶宏觀環(huán)境粘度增加宏觀環(huán)境極性增加,使得溶菌酶無論是在復(fù)性狀態(tài)還是天然狀態(tài),都可以保持一個較高的α螺旋含量來保證酶

3、活性喪失減小. 另外,在低鹽酸胍濃度(0.06mol/L)下海藻糖濃度過大時可使溶菌酶產(chǎn)生大量α螺旋結(jié)構(gòu),從而使得溶菌酶活性下降；但當(dāng)鹽酸胍濃度升高至2mol/L時,可使溶菌酶的α螺旋結(jié)構(gòu)減少,β折疊結(jié)構(gòu)增多使溶菌酶發(fā)生變性.而甜菜堿無論是在低濃度鹽酸胍(O.06mol/L)條件下輔助溶菌酶復(fù)性,還是在較高鹽酸胍濃度(2mol/L)下保護(hù)天然溶菌酶,甜菜堿都可以通過有效保護(hù)溶菌酶的高級結(jié)構(gòu),從而提高溶菌酶的復(fù)性收率并保持溶菌酶