1、背景：
　　結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率居所有惡性腫瘤第三位，死亡率居所有惡性腫瘤第二位。人參皂苷 Rg3是由人參中提取的活性成分，其可抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，并促進腫瘤細胞凋亡。WEE1蛋白是調控細胞周期G2檢查點的重要基因，其表達變化可影響DNA損傷藥物順鉑、紫杉醇、5-氟尿嘧啶等藥物對細胞的殺傷作用。在胃癌和卵巢癌的研究中發(fā)現，人參皂苷可協(xié)同增敏順鉑和5-氟尿嘧啶對細胞的增殖抑制效應。然而，人參皂苷 Rg

2、3、DNA損傷藥物和WEE1蛋白之間的作用并未見相關報道，本研究主要探討三者之間的相互關系，探討人參皂苷Rg3增敏DNA損傷藥物的相關分子機制。
　　第一部分人參皂苷Rg3通過抑制WEE1激酶表達增敏結腸癌對DNA損傷藥物敏感性的機制研究
　　研究目的：
　　探討人參皂苷Rg3是否可影響結腸癌細胞對DNA損傷藥物順鉑和5-氟尿嘧啶的增殖抑制效應及其機制。
　　研究方法
　　1.為了探討人參皂苷Rg3聯合DN

3、A損傷藥物順鉑或5-氟尿嘧啶對WiDr、SW948和COLO205等結腸癌細胞增殖活性的影響。應用CCK-8細胞增殖活性檢測法，檢測不同濃度人參皂苷Rg3聯合不同濃度DNA損傷藥物順鉑或5-氟尿嘧啶干預 WiDr、SW948和COLO205三株結腸癌細胞后對其細胞增殖活性的影響。
　　2.為了探討人參皂苷 Rg3影響結腸癌細胞增殖活性的潛在機制。應用qRT-PCR法檢測不同濃度人參皂苷Rg3干預相同時間和相同濃度人參皂苷Rg3干預

4、不同時間后結腸癌細胞內WEE1的表達水平變化。
　　3.為了探討WEE1過表達在人參皂苷Rg3影響結腸癌細胞對DNA損傷藥物順鉑和5-氟尿嘧啶敏感性過程中的作用。首先應用質粒過表達技術對WiDr，SW948和COLO205等結腸癌細胞進行WEE1過表達，并應用qRT-PCR法檢測過表達程度；其次應用CCK-8細胞增殖活性檢測法檢測10μM/L順鉑+75μM/L人參皂苷Rg3+不同pcDNA-WEE1濃度和3μM/L5-氟尿嘧啶+5

5、0μM/L人參皂苷Rg3+不同pcDNA-WEE1濃度等處理對于結腸癌細胞增殖活力的影響。
　　結果
　　1.順鉑和5-氟尿嘧啶對于結腸癌細胞WiDr、SW948和COLO205等增殖活力的抑制成濃度依賴性增加；隨著應用人參皂苷Rg3濃度（0μM/L、25μM/L、50μM/L、75μM/L）的增加，在應用相同濃度順鉑或5-氟尿嘧啶的前提下，WiDr，SW948和COLO205等結腸癌細胞的增殖活力逐漸降低；
　　2.

6、應用人參皂苷Rg3干預三株結腸癌細胞，隨著人參皂苷Rg3干預濃度（0μM/L、25μM/L、50μM/L、75μM/L和100μM/L）的增加，WiDr、SW948和COLO205等結腸癌細胞中WEE1的表達明顯降低；應用50μM/L人參皂苷Rg3干預三株結腸癌細胞，隨著人參皂苷Rg3干預時間（0 h、6 h、12 h、18 h和24 h）的增加，WiDr，SW948和COLO205等結腸癌細胞中WEE1的表達逐漸降低；
　　3.

7、應用pcDNA-WEE1質粒可在三株結腸癌細胞中成功上調WEE1的表達；在相同濃度順鉑（10μM/L）+人參皂苷 Rg3（75μM/L）干預的前提下，隨著pcDNA-WEE1質粒轉染濃度（10 ng、50 ng、100 ng、150 ng）的增加，WiDr、SW948和COLO205等結腸癌細胞的增殖活力逐漸增加；在相同濃度5-氟尿嘧啶（3μM/L）+人參皂苷Rg3（50μM/L）干預的前提下，隨著pcDNA-WEE1質粒轉染濃度（10

8、ng、50 ng、100 ng、150 ng）的增加，WiDr、SW948和COLO205等結腸癌細胞的增殖活力逐漸增加。
　　結論
　　1.人參皂苷Rg3可增敏DNA損傷藥物（順鉑和5-氟尿嘧啶）對結腸癌細胞增殖活力的抑制效應；
　　2.人參皂苷 Rg3對 WEE1表達的抑制效應呈濃度依賴性和時間依賴性增加；
　　3.過表達WEE1可減弱人參皂苷Rg3增敏DNA損傷藥物（順鉑和5-氟尿嘧啶）對結腸癌細胞增殖活力

9、的抑制效應。
　　第二部分 WEE1在結直腸癌組織中的表達及臨床病理意義分析研究目的
　　探討 WEE1蛋白在結直腸癌中的表達與結直腸癌患者臨床病理參數和預后的相關性。
　　研究方法
　　1.為了探討WEE1在結直腸癌組織和癌旁組織中的表達，應用Western blot和qRT-PCR法檢測新鮮結直腸癌組織和癌旁組織中WEE1的表達；
　　2.為了明確WEE1蛋白在結直腸癌組織中的表達與結直腸癌患者臨床病理

10、資料的相關性。應用卡方檢驗分析 WEE1蛋白的陰性表達和陽性表達與結直腸癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑、腫瘤分化程度、有無淋巴結轉移、有無遠處轉移、血清 CEA水平、有無腹膜轉移、T分期、N分期、M分期及 TNM分期等臨床病理參數的相關性；
　　3.為了探討WEE1蛋白在結直腸癌組織中的表達與結直腸癌患者預后的相關性，應用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，以 Log-rank檢驗比較WEE1蛋白的陰性表達和陽性表達與

11、患者預后的相關性；應用單因素和多因素 Cox回歸分析影響結直腸癌患者預后的危險因素。
　　研究結果
　　1.在33例結直腸癌患者病理標本中，18例患者的結直腸癌組織中，WEE1蛋白和mRNA呈高表達；而15例患者的結直腸癌組織中，WEE1蛋白和mRNA呈低表達；
　　2.免疫組織化學結果示，在142例患者的石蠟包埋結直腸癌組織中，WEE1蛋白在86例中呈陽性表達，在56例中呈陰性表達；
　　3. WEE1陽性表達

12、與結直腸癌患者的腫瘤分化程度（P=0.033）、N分期（P=0.005）、TNM分期（P=0.009）、Duke’s分期（P=0.001）和淋巴結轉移（P=0.006）等參數有明顯相關性，結果具有統(tǒng)計學意義；
　　4.根據WEE1蛋白表達水平，將所有結直腸癌患者分為陽性表達組和陰性表達組，WEE1陽性表達組患者的平均生存時間明顯短于 WEE1陰性表達組；單因素分析結果示，腫瘤大?。℉R=0.5,95％置信區(qū)間0.263-0.949

13、，P=0.034）、TNM分期（HR=1.402,95%置信區(qū)間0.934-6.176，P=0.012）、M分期（HR=1.562，95%置信區(qū)間0.231-4.685，P=0.002）、肝轉移（HR=3.462,95%置信區(qū)間1.265-10.256，P=0.014）和WEE1表達（HR=7.608,95%置信區(qū)間3.019-19.185，P＜0.001）是影響結直腸癌患者預后的危險因素；多因素 Cox比例風險回歸模型結果示，TNM分

14、期（HR=2.899,95%置信區(qū)間2.072-8.056，P＜0.001）和WEE1表達（HR=6.533,95%置信區(qū)間2.93-14.566，P＜0.001）是影響結直腸癌患者預后的獨立危險因素。
　　5.在I期結直腸癌患者中，WEE1的表達與患者OS和DFS并無明顯相關性，而在II期和III期結直腸癌患者患者中，WEE1陽性表達提示患者OS和DFS較差。
　　研究結論
　　WEE1在結直腸癌組織中呈高表達；其陽