1、嗜酸氧化亞鐵硫桿菌是目前使用最廣泛，研究最深入的浸礦微生物。它是革蘭氏陰性、化能自養(yǎng)菌，能通過(guò)氧化Fe2+、各種還原性硫化物以及H2提供生長(zhǎng)能量。A。ferrooxidans對(duì)硫的氧化利用過(guò)程十分錯(cuò)綜復(fù)雜，包括硫的活化，轉(zhuǎn)運(yùn)和硫的氧化，其中硫氧化過(guò)程主要發(fā)生在細(xì)胞周質(zhì)空間內(nèi)。但由于相關(guān)研究的缺乏，A.ferrooxidans中的硫氧化活化過(guò)程機(jī)制仍不清楚。為了進(jìn)一步研究硫及硫化礦氧化中起作用的蛋白質(zhì)，本文通過(guò)構(gòu)建嗜酸氧化亞鐵硫桿菌在不同

2、能源基質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的周質(zhì)蛋白表達(dá)圖譜，從差異蛋白質(zhì)組學(xué)角度探討硫氧化相關(guān)周質(zhì)空間蛋白的表達(dá)情況并對(duì)其進(jìn)行鑒定和特性分析，為浸礦微生物硫氧化機(jī)理的研究提供一些依據(jù)。 本研究通過(guò)滲透休克法提取嗜酸氧化亞鐵硫桿菌的周質(zhì)空間蛋白質(zhì)，并采用雙向電泳的方法，對(duì)不同培養(yǎng)條件下（單質(zhì)硫和Fe2+為營(yíng)養(yǎng)源）A.ferrooxidans周質(zhì)相關(guān)蛋白差異表達(dá)譜進(jìn)行了研究。采用雙向電泳的方法分離周質(zhì)蛋白，進(jìn)行多次重復(fù)試驗(yàn)和條件摸索，并結(jié)合胞外和外膜蛋白圖

3、譜確定是否含有其他特化空間污染，最終獲得重復(fù)性良好的周質(zhì)蛋白雙向電泳圖。雙向電泳結(jié)果經(jīng)軟件分析后鑒定出17個(gè)在硫中生長(zhǎng)時(shí)表達(dá)明顯上調(diào)的蛋白，結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF/MS）對(duì)所得17個(gè)在元素硫?yàn)榛|(zhì)培養(yǎng)時(shí)高量表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，共獲得17個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋圖譜，根據(jù)SwissPort，數(shù)據(jù)庫(kù)和特有的AFE-3217數(shù)據(jù)庫(kù)，得到了編碼蛋白的相關(guān)基因信息，并對(duì)其進(jìn)行了功能分類。本研究同時(shí)通過(guò)實(shí)時(shí)定量