基于多孔材料對(duì)嗜酸乳桿菌S-層蛋白的檢測(cè)及富集研究.pdf_第1頁(yè)
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1、乳酸菌是人體腸道中一種重要的益生菌,對(duì)腸道中的病菌有一定的抑制作用,可調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。S-層蛋白是存在于細(xì)胞膜或細(xì)胞壁外的一種表層蛋白,是乳酸菌定植于腸道上發(fā)揮益生作用的重要黏附因子。目前S-層蛋白的檢測(cè)方法成本較高且操作復(fù)雜,傳統(tǒng)的蛋白純化方法操作繁瑣,因此構(gòu)建對(duì)S-層蛋白的快速檢測(cè)方法及新的純化方法具有重要研究意義。本文主要基于光子晶體分子印跡和多孔硅這兩種多孔材料,構(gòu)建了S-層蛋白快速檢測(cè)及富集的光學(xué)傳感器。具體研究?jī)?nèi)容與結(jié)果

2、如下:
  首先用層析法純化得到S-層蛋白,以用于后續(xù)傳感材料的構(gòu)建及響應(yīng)性研究。接著采用免疫法制備了抗S-層蛋白單克隆抗體,目的是用于多孔硅生物光學(xué)傳感器的構(gòu)建。所得的S-層蛋白純度較高,S-層蛋白單克隆抗體的效價(jià)≥128K。
  采用St(o)ber法制備單分散SiO2顆粒,通過(guò)垂直沉降自組裝法制備了SiO2膠體晶體,將光子晶體與分子印跡結(jié)合構(gòu)建了反蛋白石水凝膠響應(yīng)材料,該材料為三維有序大孔結(jié)構(gòu),具有光譜自表達(dá)及響應(yīng)速度

3、快的特點(diǎn),可實(shí)現(xiàn)對(duì)S-層蛋白的免標(biāo)記快速檢測(cè);采用表面印跡法在水凝膠表面制備了S-層蛋白的印跡空穴,該印跡空穴與S-層蛋白形狀大小互補(bǔ),對(duì)S-層蛋白具有高度選擇性及高靈敏度,對(duì)不同濃度的S-層蛋白的響應(yīng)性呈現(xiàn)良好的線性結(jié)果,可實(shí)現(xiàn)對(duì)表層蛋白粗提液中S-層蛋白含量的檢測(cè),響應(yīng)時(shí)間在3min內(nèi)。此外該材料對(duì)嗜酸乳桿菌表層蛋白粗提液中的S-層蛋白有一定富集作用,有望實(shí)現(xiàn)對(duì)S-層蛋白的純化。
  將多孔硅與抗原-抗體反應(yīng)結(jié)合制備了對(duì)S-層

4、蛋白在線檢測(cè)的傳感器。采用單晶硅通過(guò)陽(yáng)極氧化法制備了單層膜多孔硅,并用二氧化鈦修飾其表面以增加其穩(wěn)定性,所得多孔硅具有良好的反射干涉性能。將多孔硅與微流控技術(shù)結(jié)合,實(shí)現(xiàn)了對(duì)檢測(cè)樣品的在線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),該傳感器對(duì)S-層蛋白具有高度選擇性和靈敏度,對(duì)不同濃度的S-層蛋白的響應(yīng)性呈現(xiàn)良好的線性結(jié)果,可實(shí)現(xiàn)對(duì)未知濃度S-層蛋白含量的測(cè)定,響應(yīng)時(shí)間為5min左右。
  綜上所述,研究得到了反蛋白分子印跡水凝膠和多孔硅生物光學(xué)傳感器,這兩種材料均

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