1、有些小分子多肽在水介質(zhì)中可自發(fā)或觸發(fā)形成超分子結(jié)構(gòu)材料，組裝形成形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能特異的自組裝體。通過(guò)設(shè)計(jì)不同的氨基酸序列可得到多種具有特殊功能的多肽納米材料。酶催化的小分子多肽自組裝因其在超分子結(jié)構(gòu)上容易進(jìn)行調(diào)整和控制，而且具有生物選擇性良好、在體內(nèi)易降解、產(chǎn)物無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)，近些年來(lái)，在生物傳感器、材料科學(xué)、生物醫(yī)藥及臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域都有廣闊的應(yīng)用前景。
　　自組裝多肽形成的獨(dú)特三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)是發(fā)揮其特異功能的基礎(chǔ)，有的結(jié)構(gòu)可以改變一些熒

2、光分子的光學(xué)性質(zhì)，因此表現(xiàn)出在水溶液中完全不同的光學(xué)行為。本研究應(yīng)用了三種酶響應(yīng)的小分子多肽Nap-GFFY-NMe、Ada-GFFY-OMe和Nap-FFK(NBD)Y，這三種酶的共同特點(diǎn)是都在堿性磷酸酶的誘導(dǎo)下形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，自組裝成超分子水凝膠。其中Nap-GFFY-NMe和Nap-FFK(NBD)Y在堿性磷酸酶誘導(dǎo)下形成以β-折疊二級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的納米纖維結(jié)構(gòu)，肉眼可見果凍樣的水凝膠，而Ada-GFFY-OMe形成納米纖維球，肉眼可

3、見渾濁現(xiàn)象。剛果紅和硫磺素T是檢測(cè)β-淀粉樣蛋白聚集體的熒光探針?lè)肿樱?dāng)結(jié)合富含β-折疊的結(jié)構(gòu)時(shí)，熒光強(qiáng)度會(huì)增強(qiáng)。堿性磷酸酶誘導(dǎo)β-折疊形成，與β-折疊結(jié)合可以增強(qiáng)剛果紅和硫磺素T熒光強(qiáng)度，形成信號(hào)的級(jí)聯(lián)放大。因此我們將三種小分子多肽引入到以堿性磷酸酶為標(biāo)記酶的ELISA檢測(cè)體系，通過(guò)獨(dú)特的信號(hào)放大原理以提高傳統(tǒng)ELISA的檢測(cè)靈敏度。
　　實(shí)驗(yàn)一我們建立了基于小分子短肽Nap-GFFY-NMe與剛果紅的信號(hào)讀出模式，實(shí)現(xiàn)了血小板

4、活化標(biāo)志物P-選擇素的定量檢測(cè)，與傳統(tǒng)ELISA相比靈敏度提高了十倍。同時(shí)，由于P-選擇素檢測(cè)有利于評(píng)價(jià)血小板活化狀態(tài)，對(duì)服用抗凝藥物的血栓患者，實(shí)施P-選擇素的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)將有助于評(píng)估治療效果，在不同時(shí)間段采集的標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)可以顯著降低系統(tǒng)誤差，增加結(jié)果的準(zhǔn)確性，我們?cè)u(píng)價(jià)了NMe-剛果紅讀出模式與ELISA分批次檢測(cè)的誤差，發(fā)現(xiàn)NMe-剛果紅讀出模式的變異系數(shù)顯著低于傳統(tǒng)ELISA，由于剛果紅形成的熒光信號(hào)較穩(wěn)定，使多個(gè)不同時(shí)間段分析的酶

5、標(biāo)板同時(shí)進(jìn)行信號(hào)讀出成為可能。
　　實(shí)驗(yàn)二我們應(yīng)用短肽Nap-FFK(NBD)Y與硫磺素T建立了一種紫外吸收和熒光雙信號(hào)讀出的肺炎支原體IgM型抗體檢測(cè)方法。肺炎支原體IgM抗體是在肺炎支原體感染早期出現(xiàn)的抗體，是輔助診斷急性感染的重要標(biāo)志物。利用該方法檢測(cè)肺炎支原體感染者血清中的IgM抗體，顯示較好的靈敏度，與臨床實(shí)驗(yàn)室用的常規(guī)檢測(cè)方法比較，相關(guān)性較好。該方法采用了一種新的ELISA信號(hào)讀出模式，實(shí)現(xiàn)了紫外吸收和熒光雙信號(hào)檢測(cè)，

6、為檢驗(yàn)工作者提供了更多選擇。
　　實(shí)驗(yàn)三我們建立了基于自組裝多肽的可視化檢測(cè)方法。鑒于堿性磷酸酶誘導(dǎo)Ada-GFFY-OMe形成肉眼可見的渾濁現(xiàn)象，在傳統(tǒng)ELISA基礎(chǔ)上，我們直接加入OMe溶液，通過(guò)肉眼觀察渾濁程度判斷檢測(cè)結(jié)果。同時(shí)在ELISA酶標(biāo)板、圓柱形的毛細(xì)管中進(jìn)行了嘗試。另外在基于NMe和剛果紅的檢測(cè)系統(tǒng)中，剛果紅顏色的變化也可以用于肉眼讀出。
　　綜上，我們引入小分子多肽，在傳統(tǒng)ELISA基礎(chǔ)上建立了全新的信號(hào)讀