1、MHC-1鏈相關(guān)基因B(MICB)又稱PerB11.2，屬MHC-Ⅰ類區(qū)域非經(jīng)典的HLA-Ⅰ類基因，具有編碼、轉(zhuǎn)錄、表達蛋白的功能。MICB基因在HLA-B基因座著絲粒端約141.2kb，全長12.9 kb。它在腸上皮細胞的表面表達，不需β2微球蛋白的輔助，也不需結(jié)合抗原肽。作為NKG2D的配體，它與NKG2D/DAP10結(jié)合、傳遞細胞活化信號，為γδT細胞、CD8+細胞、NK細胞等發(fā)揮其免疫功能提供分子基礎(chǔ)。 MICB基因是在

2、1994年首次被Bahram等人發(fā)現(xiàn)的。1997年Hitoshi Ando等人對MICB基因進行遺傳變異研究，確定了MICB基因多態(tài)性的存在。2007年，NCBI報道在MICB基因中發(fā)現(xiàn)264個SNP位點。 目前，困內(nèi)外對于MICB基因SNP頻率調(diào)查的報告較少。本研究應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)，調(diào)查遼寧地區(qū)北方漢族人群MICB基因第3外顯子437817SNP位點及啟動子區(qū)445861/446216位點的分布狀況，為法醫(yī)學個人識別和

3、親權(quán)鑒定提供必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 材料與方法 1、228例靜脈抗凝血取自遼寧地區(qū)漢族健康無血緣關(guān)系獻血者。40例已知親緣關(guān)系家系由法醫(yī)血清學教研室提供。 2、應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)調(diào)查遼寧地區(qū)北方漢族人群MICB基因第3外顯子437817位點及啟動區(qū)445861/446216位點頻率，并用于親子鑒定案例。 3、直接計數(shù)法計算437817、445861、446216位點SNP頻率；進行Hardy-Weinbe

4、rg平衡檢驗以及連鎖不平衡分析；按Fisher法計算個人識別率(DP)，按Odelberg法計算非父排除率(EPP)，不同群體之間等位基因頻率分布的差異用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行卡方檢驗。 實驗結(jié)果 1、437817位點在遼寧地區(qū)漢族人群中檢測出兩個等位基因C/G，等位基因C的頻率為0.933，等位基因G的頻率為0.067，兩個等位基因可以構(gòu)成三種基因型：C/C型、C/G型和G/G型。其中C/C型197例，C/G型3

5、1例，頻率分別為86.4％、13.6％，未檢測出G/G型。 2、445861/446216位點構(gòu)成四種等位基因組合型，在遼寧地區(qū)漢族人群中只檢測出GC、GG、CC三種等位基因組合型，未檢測出CG型。其中GC等位基因組合的頻率為55.0％，GG為28.3％，CC為16.7％。在445861/44.6216位點10種理論組合基因型中檢出6種，即GG/GC、GC/GC、CC/GC、CC/GG、GG/GG和CC/CC，頻率分別為32.9

6、％、28.9％、19.3％、8.8％、7.5％和2.6％。 3、用MICB基因445861/446216位點等位基因組合型檢測40例親子鑒定案例，有36例雙親均可以提供給孩子相應(yīng)的等位基因；4例被控父不能提供給孩子相應(yīng)等位基因，提示可能排除。 討論 MICB基因與MICA及HLA-Ⅰ類基因相似，具有較高的遺傳多態(tài)性。隨著研究深入發(fā)展，所發(fā)現(xiàn)MICB單核苷酸變異的數(shù)目越來越多。到目前為止，已經(jīng)確定的SNP的數(shù)目可達

7、264個。MICB基因作為功能性基因，其多態(tài)性與某些免疫性疾病有關(guān)。437817、445861/446216SNP位點的變異與某些免疫性疾病的相關(guān)性也有待進一步研究。 為證實MICB445861/446216位點組合基因型酶切結(jié)果的可靠性，我們對PCR擴增產(chǎn)物進行測序分析，所得結(jié)果與目的序列一致。 目前尚未見到有關(guān)MICB基因437817SNP位點頻率的其他報道。445861/446216位點的研究報道只見于西班牙人群，

8、應(yīng)用SPSS13.0軟件對遼寧漢族和西班牙人群進行比較分析，結(jié)果表明有顯著性差異。 445861/446216位點等位基因組合是具有較高鑒別能力的遺傳標記系統(tǒng)，個人識別幾率可達0.756，非父排除率為0.3437。在法醫(yī)學個人識別和親子鑒定中具有較高的應(yīng)用價值。應(yīng)用MICB基因445861/446216位點等位基因組合型對40例親子鑒定進行檢測，36例未排除生物學親子關(guān)系，4例的被控父不能提供生物學父親應(yīng)該具有的組合型，提示排除

9、父權(quán)。上述研究結(jié)果表明該系統(tǒng)可以應(yīng)用于法醫(yī)學親子鑒定。 結(jié)論 1、MICB基因437817、445861、446216三個SNP位點在遼寧漢族群體中具有遺傳多態(tài)性，且符合Hardy-Weinberg平衡。 2、MICB基因445861/446216位點等位基因組合型分布在中國遼寧漢族和西班牙人群之間具有群體差異。 3、MICB基因445861/446216位點等位基因組合具有較高的個人識別能力和非父排除率