1、目的：
　　構(gòu)建實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎小鼠模型，觀(guān)察HMGB1對(duì)心肌組織巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和極化的影響，體外對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行初步研究，闡明重要炎癥介質(zhì)HMGB1在EAM發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，對(duì)浸潤(rùn)心肌的Mφ極化的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎小鼠模型的構(gòu)建：將豬心肌肌球蛋白制備成抗原肽，多次多點(diǎn)注射于小鼠背部皮下，至21天建模結(jié)束，進(jìn)行心肌組織切片HE染色和病理評(píng)分。
　　2.心肌組織巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)

2、與極化分析：免疫熒光檢測(cè)EAM小鼠心肌組織浸潤(rùn)的F4/80+CD86+巨噬細(xì)胞。
　　3. HMGB1對(duì)EAM小鼠心肌組織巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和極化的影響：用HMGB1抑制劑丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate，EP）抑制EAM模型中HMGB1的表達(dá)與釋放，進(jìn)行心肌組織切片HE染色和病理評(píng)分，免疫熒光檢測(cè)EAM小鼠心肌組織浸潤(rùn)的F4/80+CD86+巨噬細(xì)胞。
　　4. HMGB1在體外對(duì)巨噬細(xì)胞的極化作用：通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量 P

3、CR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）和蛋白印跡（western blot）檢測(cè)HMGB1處理后ANA-1巨噬細(xì)胞和小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞iNOS、Arg-1的mRNA和蛋白水平表達(dá)量；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清NO分泌量。
　　5. HMGB1體外誘導(dǎo)ANA-1巨噬細(xì)胞極化的分子機(jī)制：HMGB1處理ANA-1巨噬細(xì)胞后，western blot檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)PI3K和E

4、RK1/2磷酸化水平，并使用ERK1/2抑制劑U0126抑制ERK1/2磷酸化，再給以HMGB1處理，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)胞內(nèi)iNOS、Arg-1的mRNA水平表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.成功構(gòu)建實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎小鼠模型。
　　2. EAM小鼠心肌組織F4/80+CD86+M1型巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)顯著多于對(duì)照組。
　　3. qRT-PCR結(jié)果證明EP可顯著抑制HMGB1表達(dá)，且與未處理組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<

5、0.05）。免疫熒光結(jié)果顯示，EAM+EP組浸潤(rùn)的F4/80+CD86+巨噬細(xì)胞顯著少于EAM組。
　　4. qRT-PCR、Western blot和ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HMGB1處理過(guò)的ANA-1巨噬細(xì)胞和小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞中iNOS的表達(dá)量增多，NO的產(chǎn)生與分泌增多，而Arg-1的表達(dá)減少，即巨噬細(xì)胞向促炎的M1型極化。
　　5. HMGB1作用于A(yíng)NA-1巨噬細(xì)胞后， western blot結(jié)果顯示， PI3K和

6、ERK1/2磷酸化水平顯著增高，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且使用U0126抑制ERK1/2磷酸化后再給以HMGB1處理時(shí)，與未使用抑制劑組相比，iNOS的mRNA含量明顯降低，而Arg-1 mRNA表達(dá)卻增多。
　　結(jié)論：
　　1.實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎小鼠心肌組織中F4/80+CD86+巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)增多，抑制HMGB1表達(dá)可顯著減少F4/80+CD86+巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　2. HMGB1促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1極化可能是