1、目的：
　　輕鏈型淀粉樣變(AL)是一種腫瘤性漿細胞產生的輕鏈沉積在各個器官導致其功能不全的血液疾病。如無有效的治療，患者的生存期僅有1～2年。心臟受累程度是決定AL患者預后的重要因素。但是，AL中輕鏈致心肌毒性的機制還不清楚。另外，AL輕鏈(AL-LC)的來源受限也是困擾研究者們的一個重要問題，目前AL-LC的主要來源是從患者尿液中提取，存在獲取AL-LC總量有限及LC的異質性等諸多問題，而從原核系統(tǒng)表達AL-LC則導致其翻譯后

2、修飾缺乏。因此，建立穩(wěn)定表達AL-LC的真核表達平臺也至關重要。
　　方法：
　　通過構建pcDNA3.1重組質粒，轉入293T細胞體外表達IGLV1-44來源的AL心肌毒性輕鏈，建立AL輕鏈的真核系統(tǒng)表達平臺。將合成的AL輕鏈作用于心肌細胞，并設置多發(fā)性骨髓瘤輕鏈(MM-LC)對照及空白對照，研究輕鏈與H9C2心肌細胞的相互作用。首先，通過免疫熒光激光共聚焦定位檢測輕鏈與心肌細胞的定位關系。其次，用流式細胞術檢測心肌細胞的

3、凋亡率及活性氧自由基(ROS)水平。再次，用Western Blot分析心肌細胞蛋白表達水平的變化，探究AL輕鏈心肌毒性可能涉及的分子通路。
　　結果：
　　轉入pcDNA3.1重組質粒的293T細胞穩(wěn)定合成表達AL輕鏈，AL輕鏈的真核系統(tǒng)表達平臺成功建立。AL與MM輕鏈均可進入心肌細胞，但AL輕鏈明顯多于MM輕鏈，且能在細胞外間質形成沉積，包繞心肌細胞。然而，AL輕鏈與MM輕鏈均不與線粒體共定位。將體外合成的AL輕鏈作用于

4、心肌細胞引起細胞凋亡，使用濃度為40μg/ml、60μg/ml及80μg/ml的AL輕鏈作用心肌細胞24h后的凋亡率分別為10％、18％和26％，相比MM輕鏈對照及空白對照(～5％)明顯升高。利用DCFH-DA檢測心肌細胞ROS水平，60μg/ml AL輕鏈作用2h及4h后心肌細胞的MFI值分別為13018.39±338.37及16766.86±29.47，其中4h組顯著高于對照組水平（MM組:13191.70±409.04，空白對照1

5、2917.81±614.69）。同時，在作用6h或12h時，AL組的凋亡標志物c-casp3水平均可檢測到顯著升高。分子通路方面，AL輕鏈處理心肌細胞6h及12h后，p-p38MAPK水平較MM組及空白對照升高，且下游的PP2A水平在6h時明顯升高，12h時回到對照水平，但NF-κB、p-MEK1/2及JNK水平AL組與對照無明顯差別。另外，AL輕鏈可引起心肌細胞p-AMPK及下游FoxO3水平下降，但激活AMPK并不能逆轉心肌細胞的凋