1、該研究以性別決定方式為溫度決定型(Temperature-dependent sex determination,TSD)的揚(yáng)子鱷(Alligator sinensis)和中華鱉(Trionyx sinensis)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用兼并引物PCR,從揚(yáng)子鱷和中華鱉的基因組DNA中分別克隆并測(cè)序8個(gè)和7個(gè)HMG盒區(qū),每個(gè)盒區(qū)長(zhǎng)度均為216bp.揚(yáng)子鱷的8個(gè)HMG盒區(qū)命名為AS41~48基因,中華鱉的7個(gè)HMG盒區(qū)命名為T(mén)S41~47基因.8

2、個(gè)AS基因組成3組(Class),7個(gè)TS基因也組成3組,但AS與TS之間沒(méi)有互相重疊.進(jìn)一步序列分析表明:AS41~42、TS41~42與非爬行類(lèi)脊椎動(dòng)物的Sox-1、-2、-3的氨基酸同源性低于非爬行類(lèi)脊椎動(dòng)物包括哺乳類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)和魚(yú)類(lèi)的Sox-1、-2、-3相互之間的氨基酸同源性,.分子系統(tǒng)發(fā)生分析表明AS41~42和TS41~42的成簇(Cluster)偏離非爬行類(lèi)脊椎動(dòng)物Sox-1、-2、-3同源基因之間的成簇,顯示了AS

3、41~42和TS41~42在物種內(nèi)的特異性進(jìn)化,并且序列變化一定發(fā)生在羊膜動(dòng)物多樣化之后.該研究首次在爬行動(dòng)物中克隆了哺乳動(dòng)物睪丸決定基因(SRY)的起源基因(Sox3)的同源序列,有助于進(jìn)一步研究Sox基因與溫度決定型性別決定的關(guān)系.為了克隆到與胚胎發(fā)育有關(guān)的新基因,以孵化一星期的中華鱉(Trionyx sinensis)胚胎的頭部、生殖嵴混合組織為原始材料,采用SMART(Switching Mechanism At 5′end o

4、f RNA Transcript)和長(zhǎng)距離PCR(LD-PCR)技術(shù),構(gòu)建了一個(gè)中華鱉cDNA表達(dá)文庫(kù).采用RPGW-PCR(Random Primed Gene Walking PCR)方法,從經(jīng)EcoRI消化過(guò)的中華鱉(Trionyx sinensis)基因組DNA中克隆了CtSox2基因(720bp),它與鼠、鳥(niǎo)的Sox2基因分別有85﹪和91﹪的核苷酸同源性,93﹪和97﹪的氨基酸同源性.進(jìn)一步分析表明,CtSox2編碼的238