1、細胞應(yīng)激效應(yīng)及其分子機制的初步研究應(yīng)激可以嚴(yán)重干擾細胞的正常的生命活動.高溫和紫外線日常生活中兩種最常見的物理刺激,本論文主要研究了高溫和紫外照射對細胞生命活動包括細胞周期及凋亡的影響.第一部分熱應(yīng)激細胞效應(yīng)的基本特征1熱休克對A549細胞周期的影響42℃×1小時熱休克處理可以引起A549細胞周期產(chǎn)生兩種阻滯,一個在G1期,另一個在G2/M期.產(chǎn)生這兩種不同的阻滯結(jié)果可能是因為熱休克時細胞所處的細胞周期時相不同.2熱休克對Jurkat細

2、胞周期的影響相同條件的熱休克處理對Jurkat細胞周期的影響與A549細胞不同.3熱休克對G1期同步化A549細胞的影響4熱休克對細胞凋亡的影響5熱休克引起的細胞周期阻滯的機制第二部分Hsp90特異性抑制劑geldanamycin(GA)對細胞周期的影響1熱休克細胞中hsp90α、hsp90β mRNA表達增加應(yīng)用競爭性RT-PCR技術(shù)檢測熱休克處理的Jurkat細胞中hsp90α和hsp90β mRNA水平的變化,發(fā)現(xiàn)熱休克后兩種mR

3、NA顯著增加.說明熱休克對hsp90α和hsp90b有很強的誘導(dǎo)作用.2GA對細胞周期的影響在正常培養(yǎng)條件下GA對Jurkat細胞和A549細胞周期的運行有明顯的阻滯作用并可誘導(dǎo)細胞發(fā)生凋亡.3 Hsp90對細胞維持正常生命活動至關(guān)重要在熱休克和非熱休克條件下用GA處理A549細胞,培養(yǎng)48小時后,發(fā)現(xiàn)無論是否受到熱休克處理細胞均發(fā)生明顯的形態(tài)學(xué)改變.第三部分UVC對細胞周期與凋亡的影響1 UVC對Jurkat細胞凋亡的誘導(dǎo)2 UVC對

4、A549細胞周期及凋亡的影響第四部分hsp90β基因第一外顯子中非典型p53結(jié)合位點對hsp90β啟動子活性的影響通過競爭性RT-PCR技術(shù)檢測了hsp90β基因第一外顯子中非典型p53結(jié)合位點在熱休克和UVC照射后對hsp90β啟動子活性的影響,發(fā)現(xiàn)該位點無論在組成性狀態(tài)下還是應(yīng)激條件下均可增加hsp90β啟動子活性,該位點突變后,hsp90β啟動子活性明顯降低.在此實驗中還發(fā)現(xiàn)熱休克可以誘導(dǎo)hsp90β基因啟動子活性,而UVC照射后