硒對(duì)雞成肌細(xì)胞分化及骨骼肌炎癥基因表達(dá)影響的研究.pdf_第1頁
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1、硒作為人和動(dòng)物必需的微量元素,在肌肉的新陳代謝過程中起著重要的作用。肌肉是因缺硒受損的主要組織,硒缺乏能引起包括人類的多種動(dòng)物骨骼肌和心肌纖維改變,從而導(dǎo)致以心肌和骨骼肌出現(xiàn)鈣化、變性、血管損壞及出血等特征的疾病。硒在生物體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)功能主要是通過硒蛋白發(fā)揮。硒蛋白W(Selenoprotein W,SelW)是硒蛋白家族中的重要成員,在骨骼肌和心肌中均高表達(dá),并且對(duì)維持正常骨骼肌生理功能有重要作用。目前對(duì)哺乳動(dòng)物SelW的研究已有相

2、關(guān)報(bào)道,但對(duì)禽類SelW的研究,尤其是對(duì)與SelW相關(guān)的缺硒性肌病的研究甚少,并且對(duì)缺硒性肌病過程中的基因表達(dá)調(diào)控與發(fā)病機(jī)理的研究還是空白。本研究在建立缺硒雞模型和原代培養(yǎng)成肌細(xì)胞的基礎(chǔ)上,應(yīng)用形態(tài)學(xué)觀察、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)等,檢測(cè)了培養(yǎng)基中添加不同水平硒(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5M)添加后12、24、48和72 h雞骨骼肌成肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化、SelW和分化因子(Myf-5、Myogenin、MRF4) m

3、RNA表達(dá),并進(jìn)行了相關(guān)性分析;分別對(duì)15、25、35、45和55日齡雛雞的翅肌、胸肌及腿肌的SelW及炎癥基因(NF-κB、TNF-α、iNOS、COX-2、PTGES)的mRNA表達(dá)量變化及相關(guān)性進(jìn)行分析,結(jié)果表明:
   1.通過對(duì)原代培養(yǎng)雞骨骼肌成肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征變化的觀察,表明培養(yǎng)基中添加適量的硒濃度(10-7 M)能促進(jìn)骨骼肌細(xì)胞分化進(jìn)程,而過高的硒濃度10-5M)會(huì)顯著抑制細(xì)胞分化,降低細(xì)胞活性。證明硒對(duì)雞成肌細(xì)胞

4、分化有重要作用,而過高的硒濃度添加會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用,抑制雞成肌細(xì)胞分化。
   2.雞胚成肌細(xì)胞中添加10-7M濃度硒時(shí)SelW mRNA表達(dá)量最高,即10-7M硒濃度是雞胚成肌細(xì)胞SelW mRNA表達(dá)最佳硒添加濃度。培養(yǎng)基中硒濃度為10-5M時(shí)的雞成肌細(xì)胞SelW mRNA表達(dá)有抑制作用。
   3.隨培養(yǎng)基中硒濃的升高,三種調(diào)節(jié)因子Myf-5、Myogenin及MRF4 mRNA水平呈先升高再降低的變化趨勢(shì),在1

5、0-7和10-8M硒濃度時(shí)出現(xiàn)表達(dá)量的最高峰值,然而硒濃度為過10-5 M時(shí)成肌調(diào)節(jié)因子的mRNA表達(dá)量最低,這與形態(tài)學(xué)分析結(jié)果一致,提示適量硒添加促進(jìn)雞骨骼肌成肌細(xì)胞分化進(jìn)程。Myf-5、Myogenin、MRF4與SelW mRNA均呈顯著正相關(guān),推測(cè)SelW可能在成肌細(xì)胞分化進(jìn)程中發(fā)揮一定作用。
   4.低硒飼料能降低不同日齡雞胸肌、翅肌、腿肌中SelW mRNA的表達(dá),尤其在低硒組腿肌中其表達(dá)量顯著降低。
  

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