1、目的：通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，研究不同炮制方法對(duì)何首烏抗AD作用的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：（1）應(yīng)用MTT法，檢測(cè)H2O2不同濃度和時(shí)間對(duì)PC12細(xì)胞損傷以建立AD細(xì)胞模型，以此模型研究何首烏生品、清蒸品和黑豆制品（10mg生藥/mL、5mg生藥/mL、2.5mg生藥/mL）及其含藥血清（血清濃度為20%、10%、5%）對(duì)正常PC12細(xì)胞增殖和H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的影響，并用化學(xué)比色法檢測(cè)P C12細(xì)胞LDH釋放

2、量、細(xì)胞內(nèi)MDA含量和SOD活性。
　　（2）采用跳臺(tái)法考察何首烏生品、清蒸品和黑豆制品（20g生藥/k g、10g生藥/k g、5g生藥/k g）對(duì)東莨菪堿、亞硝酸鈉、乙醇分別導(dǎo)致記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。
　　（3）小鼠腹腔注射D-半乳糖（120mg/kg）和東莨菪堿（0.5mg/kg）并喂食三氯化鋁（5mg/kg）制備AD小鼠模型。應(yīng)用Morris水迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力；化學(xué)比色法檢測(cè)小鼠血清

3、S OD、G SH-P X、ALT和AST活力及MDA、Cr和BUN含量；化學(xué)比色法檢測(cè)小鼠腦組織SOD、GSH-PX、ChAT、TChE活力和MDA含量；采用HE染色法觀察小鼠腦海馬的病理變化；免疫組織化學(xué)方法觀察小鼠腦海馬淀粉樣蛋白β（Aβ）的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）對(duì)PC12細(xì)胞影響：何首烏清蒸品、黑豆制品能顯著升高細(xì)胞內(nèi)SOD活性、降低MDA含量和LDH釋放量（P<0.05)，從而對(duì)H2O2致PC12細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，且

4、黑豆制品效果較好；生品雖能刺激PC12細(xì)胞增殖，但同時(shí)顯著升高M(jìn)DA含量和LDH釋放量（P<0.05)，表明其對(duì)P C12細(xì)胞無(wú)明顯保護(hù)作用。何首烏生品及不同炮制品含藥血清通過(guò)顯著升高細(xì)胞內(nèi)SOD活性、降低MDA含量和LDH釋放量（P<0.05)，對(duì)H2O2致 PC12細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。
　?。?）對(duì)學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的影響：何首烏生品及不同炮制品高劑量可顯著延長(zhǎng)東莨菪堿致記憶獲得障礙小鼠潛伏期，并減少小鼠5 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)（P

5、<0.05）；黑豆制品高、中劑量能明顯延長(zhǎng)亞硝酸鈉致記憶鞏固障礙小鼠潛伏期，而清蒸品高劑量能明顯減少小鼠5 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)（P<0.05)；生品和黑豆制品高、中劑量能顯著延長(zhǎng)乙醇致記憶再現(xiàn)障礙小鼠潛伏期，并減少小鼠5 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)（P<0.05)。
　　（3）對(duì)AD小鼠的影響：（1）Morris水迷宮結(jié)果：模型組小鼠表現(xiàn)出明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙（P<0.05），何首烏生品及不同炮制品各劑量組小鼠逃避潛伏期較模型組縮短，在原平臺(tái)象

6、限的停留時(shí)間較模型組增多，清蒸品和黑豆制品中劑量組小鼠穿越原平臺(tái)次數(shù)均明顯多于模型組（P<0.05），綜合評(píng)價(jià)各研究指標(biāo)表明黑豆制品改善AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力優(yōu)于清蒸品和生品。（2）血清檢測(cè)結(jié)果：與模型組比較，生品、清蒸品和黑豆制品組小鼠血清 SOD活性顯著升高，MDA含量明顯降低（P<0.05）；清蒸品高劑量和黑豆制品高、中劑量組小鼠血清GSH-Px活性顯著升高（P<0.05）；生品中劑量組小鼠血清ALT水平明顯升高且生品高、中劑量組小

7、鼠血清ALT水平較清蒸品和黑豆制品明顯升高（P<0.05），表明生品有損傷肝臟的不良反應(yīng)；且生品高、中劑量組小鼠血清中Cr、BUN水平較清蒸品和黑豆制品有升高的趨勢(shì)，提示其有一定的腎臟損傷的不良反應(yīng)。從總體趨勢(shì)看，黑豆制品和清蒸品提高機(jī)體抗氧化防御體系功能優(yōu)于生品，且未表現(xiàn)出肝、腎損害的不良反應(yīng)。（3）腦組織檢測(cè)結(jié)果：與模型組比較，生品、清蒸品和黑豆制品組小鼠腦內(nèi)SOD和GSH-Px活性顯著升高，MDA水平明顯降低（P<0.05），其中

8、清蒸品和黑豆制品低劑量組小鼠腦內(nèi)MD A水平明顯低于生品（P<0.05）；生品高劑量和黑豆制品高、中劑量組小鼠腦內(nèi)C hAT水平明顯升高（P<0.05）；生品中劑量組小鼠腦內(nèi)TChE水平明顯降低（P<0.05），綜合評(píng)價(jià)各項(xiàng)指標(biāo)表明黑豆制品增強(qiáng)小鼠腦組織抗氧化能力優(yōu)于生品和清蒸品，黑豆制品和生品均能顯著增強(qiáng)小鼠中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能，生品作用稍強(qiáng)。（4）HE和IHC結(jié)果：與模型組比較，生品、清蒸品、黑豆制品各組小鼠海馬CA1區(qū)損傷神經(jīng)元

9、細(xì)胞得到明顯恢復(fù)；黑豆制品中劑量和清蒸品高、中劑量組小鼠海馬 CA1區(qū) Aβ表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），表明黑豆制品和清蒸品通過(guò)抑制Aβ過(guò)度表達(dá)來(lái)保護(hù)小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞作用優(yōu)于生品。
　　結(jié)論：何首烏生品、清蒸品和黑豆制品通過(guò)改善小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、提高機(jī)體抗氧化防御體系的機(jī)能、增強(qiáng)小鼠腦組織抗氧化能力、增強(qiáng)中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能和抑制Aβ對(duì)小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷等方面發(fā)揮抗AD作用，但長(zhǎng)期使用何首烏生品可延緩小鼠體重的增長(zhǎng)，并