1、目的：
　　探討microRNA-10a-5p在大鼠心梗后心衰發(fā)生發(fā)展過程中的變化及其作用機制，并明確其在大鼠心肌細胞凋亡中發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　對健康SD大鼠行冠狀動脈左前降支結扎（LAD）術建立心梗后心衰模型。通過監(jiān)測大鼠體重并用超聲心動圖測量并計算大鼠左室短軸縮短率和左室射血分數(shù)等指標確定心衰模型的建立成功。培養(yǎng)出生1-3天的SD乳鼠心室肌細胞，苯腎上腺素（PE）誘導心肌細胞肥大建立心肌細胞肥大模型，通過

2、觀察細胞表面積，測量心肌肥大標志性基因表達變化等指標確定肥大模型的成功建立。脂質體轉染人工合成的大鼠miRNA-10a-5p模擬物或抑制劑，使心肌細胞過表達miR-10a-5p或抑制其miR-10a的表達。
　　實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測miR-10a-5p的表達量及ANP，BNP等心衰標志分子的mRNA水平表達量。Western Blot方法檢測心衰相關蛋白，凋亡相關蛋白及靶蛋白的表達量。生物信息學預測miR-10

3、a-5p的候選靶基因，采用雙熒光報告基因檢測系統(tǒng)檢測熒光素酶的表達量，反映miRNA在離體體系中能否調控此基因表達。
　　結果：
　　一、miR-10a-5p的表達量在心衰模型中升高
　　采用LAD成功建立大鼠心衰模型，心衰組（Mol）大鼠相比于假手術組(Sham)大鼠，體重下降，活動減少，精神狀態(tài)差，毛發(fā)無光澤。結扎后，LVFS降低了近50%（P<0.01），LVEF降低了約35%（P<0.01）。相比于Sham組，

4、Mol-I組(Mol組心肌梗死區(qū))的ANP表達量增高約75倍（P<0.01），而BNP含量增高約17倍（P<0.01）。相比于Sham組，Mol-R（Mol組心肌非梗死區(qū)）組的ANP表達了增高約20倍（P<0.01），而BNP含量增高約15倍（P<0.05）。結扎組大鼠心臟梗死區(qū)（Mol-I）ANP mRNA水平表達量比Sham組增高了約75倍（P<0.01），結扎組大鼠非梗死區(qū)（Mol-R）ANP mRNA水平表達量比Sham組增高約

5、20倍（P<0.01）；如圖1-3所示，Mol-I組BNP的mRNA水平表達量比Sham組增高約17倍（P<0.01），Mol-R組BNP mRNA水平表達量比Sham組增高約15倍（P<0.05）。Mol組miR-10a-5p表達量比于Sham組增高了1.8倍（P<0.05）。
　　二、明確GATA6是miR-10a-5p的靶基因
　　生物信息學方法篩選出GATA6是miR-10a-5p的候選靶基因，雙熒光素酶報告基因結果

6、顯示，miR-10a-5p能直接抑制GATA6的表達。Western Blot結果顯示，無論在心衰大鼠模型中還是在心肌肥大細胞中，miR-10a-5p和GATA6蛋白水平的變化都是相反的。過表達miR-10a-5p后，GATA6蛋白顯著降低。
　　三、miR-10a-5p的表達量在心肌細胞肥大模型中降低
　　PE誘導心肌細胞成功的建立了心肌細胞肥大模型。相比于CON組，PE50組ANP，BNP的表達量均增高，但無統(tǒng)計學差異。

7、相對于CON組，PE100組的ANP表達量增加了約18倍（P<0.01），BNP的表達量增加了約88倍（P<0.05）；相對于CON組，PE200組的ANP表達量增加了約37.5倍（P<0.01），而BNP增加了160多倍（P<0.01）。PE組較CON組細胞表面積顯著增加。PE組較CON組，miR-10a-5p表達量降低（P<0.01）。
　　四、miR-10a-5p促進大鼠心肌細胞凋亡
　　PI單染后，熒光顯微鏡觀察結果

8、顯示，過表達miR-10a-5p后，凋亡細胞個數(shù)顯著增加；抑制miR-10a-5p的表達，凋亡細胞個數(shù)降低。Western Blot結果顯示，過表達miR-10a-5p能增加cleaved-caspase3的蛋白表達量，抑制Bcl-2的蛋白表達量。
　　結論：
　　本研究通過大鼠左冠狀動脈前降支結扎所建立的大鼠心梗后心衰模型和苯腎上腺素刺激所建立的體外培養(yǎng)的大鼠乳鼠心肌細胞肥大模型，利用分子生物學，細胞生物學和生物信息學的方