1、目的:探討人臍血(Umbilical cord blood,UCB)造血干/祖細(xì)胞(Hematopoietic stem/progenitor cells,HSC/HPC)在適合臨床移植條件下體外擴(kuò)增以獲得理想的造血干/祖細(xì)胞數(shù)量的最佳細(xì)胞因子組合及擴(kuò)增時間,為UCB經(jīng)體外擴(kuò)增后成為高體重受者克服臍血移植(Umbilical cord bloodtransplantation,UCBT)細(xì)胞數(shù)量不足及縮短植入時間提供客觀指標(biāo).方法:采集

2、UCB10份,分離單個核細(xì)胞(mononuclear,MNC),免疫磁珠分選(MiniMACS)CD34<'+>細(xì)胞,4份UCB CD34<'+>細(xì)胞分別在在細(xì)胞因子組合為A:SCF+FL+TPO、B:SCF+FL+TPO+IL-3及C:SCF+FL+TPO+G-CSF支持的無血清、無基質(zhì)的液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)14天,收集擴(kuò)增前、擴(kuò)增后7天及14天的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表型分析、半固體集落培養(yǎng)及端粒酶活性分析.結(jié)果:在含細(xì)胞因子IL-3組擴(kuò)增培

3、養(yǎng)第7天及第14天,均獲得了總有核細(xì)胞數(shù)(Total nucleated cells,TNC)及集落形成細(xì)胞(colony-forming cell,CFC)最大的擴(kuò)增倍數(shù).擴(kuò)增第7天,IL-3組的CD34<'+>細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)為(10.11±7.21)倍,較其它兩組稍低,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三組CD<,33><'+>細(xì)胞、CD<,41><'+>細(xì)胞、CD<,71><'+>細(xì)胞也得到了較大程度的擴(kuò)增,IL-3組高于其它兩組;三組擴(kuò)增后的細(xì)胞端

4、粒酶活性均上調(diào),其OD值達(dá)最高,含IL-3組低于含G-CSF組(P=0.008).隨著擴(kuò)增時間的延長,擴(kuò)增后的細(xì)胞端粒酶活性均下降;CD34<'+>細(xì)胞占TNC的比例也明顯下降,其它定向祖細(xì)胞的比例也出現(xiàn)先升高后下降的現(xiàn)象.結(jié)論:在SCF、FL、TPO及IL-3存在下,單份UCB的部分體外擴(kuò)增7天內(nèi),可獲得較大量的TNC及HPC,同時定向祖細(xì)胞的比例得以提高,與以配合支持長期植入的非擴(kuò)增的UCB細(xì)胞共同組成移植物,從而加速移植早期的植入