1、目的：通過建立大鼠肝臟缺血再灌注模型，觀察缺血后處理(ischemicpostconditioning,IPO)在肝臟缺血再灌注損傷(ischemiareperfusion,IR)中對膽管細胞的保護作用。探討缺血后處理抑制膽管細胞凋亡的機制，為臨床中肝臟缺血再灌注時減輕膽道的損傷提供更加有效的措施及理論機制。
　　方法：
　　1、模型制備：24只清潔級健康雄性SD大鼠，體重200g-300g，隨機分為3組:假手術組(sham

2、–operation，SO組)、缺血再灌注組(ischemiareperfusion，IR組)、缺血后處理組(ischemicpostconditioning，IPO組),每組8只。各組SD大鼠適應性喂養(yǎng)l周，術前12小時內禁食，自由進水。均采取0.3％戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔內注射麻醉，麻醉成功后，將大鼠平臥位固定于手術臺，備皮消毒。所有手術操作均在無菌條件下進行。1）.假手術組（SO組）：大鼠麻醉后，常規(guī)備皮、消毒，鋪無菌巾，于

3、上腹部正中取一長約3-4厘米（能使肝臟充分顯露即可）縱行切口，將腹壁各層依次切開，肝臟顯露后進一步游離出肝十二指腸韌帶關腹，無其他干預。目的是作為正常對照組以排除手術因素對實驗結果的干擾。2）.缺血再灌注組（IR組）：在SO組基礎上，游離肝十二指腸韌帶后，模擬Pringle法，用無損傷動脈夾將肝門區(qū)域夾閉，造成肝臟缺血，缺血30min后取下血管夾，使血管開放，對肝臟行持續(xù)再灌注，最后關腹。3）.缺血后處理組（IPO組）：在IR組基礎上，

4、血供完全恢復之前再灌注10秒，夾閉10秒，如此反復行6個循環(huán)（共2分鐘）后完全恢復血供。
　　2、各組大鼠于術后4小時候進行標本采集，采血器經心臟采血后，常溫下靜置30min，然后放入離心機3000r/min，離心15min，離心完成后提取血清標本，存放于-80℃冰箱保存，待檢測超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）活力、r-谷氨酰胺轉酞酶（Glutamyltranspeptidase，r-GT）活性。同

5、時于肝門部位取肝組織標本，置于10%中性福爾馬林溶液固定24小時后，石蠟包埋，備檢。
　　3、應用比色法檢測血清SOD及r-GT水平。
　　4、用HE染色法觀察、比較膽管細胞的形態(tài)變化；
　　5、應用免疫組化法檢測膽管細胞Bcl-2及Bax的表達水平；
　　6、脫氧核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatedd-UTPnickend

6、labeling,TUNEL)檢測膽管細胞凋亡，并計算細胞凋亡指數(shù)(apoptosisindex,AI)。
　　7、實驗數(shù)據(jù)采用spss13.0軟件進行處理，結果用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組數(shù)據(jù)比較采用方差分析SNK法，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　(1)HE染色結果顯示：SO組肝組織中肝細胞條理整齊，肝小葉的結構未見損壞，匯管區(qū)正常，膽管的結構無異常，偶可見少量中性粒細胞的浸潤。IR組則

7、可見部分肝小葉無清晰的結構顯現(xiàn)，在中央靜脈的周圍可見壞死的大片的肝細胞，匯管區(qū)肝內膽管可見上皮細胞的損傷，并伴有大量的炎性細胞的浸潤，細胞凋亡較多。IPO組病理改變較IR組明顯減輕，肝小葉結構相對完整，肝細胞變性的程度減輕，匯管區(qū)炎性浸潤較輕，膽管上皮連續(xù)完整，炎細胞浸潤少。
　　(2)反應膽管上皮細胞損傷的標志物r-GT在假手術組活力值最低，IR組最高，IPO組活力值較SO組升高，但較IR組減低，且差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.0

8、5）。
　　(3)血清中SOD的表達水平顯示SOD的活力值在各組之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　(4)抗細胞凋亡蛋白Bcl-2的表達：SO組膽管組織中Bcl-2陽性表達率低于IR組及IPO組，且差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。IR組膽管Bcl-2陽性表達率低于IPO組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　(5)促細胞凋亡蛋白Bax的表達：IR組及IPO組Bax陽性表達率高于SO組，IPO組的陽性表達率

9、低于IR組，且差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　(6)膽管組織細胞凋亡水平：SO組膽管組織中僅可見有少量凋亡細胞表達，凋亡指數(shù)為26.06±2.27，而在IR組中凋亡細胞數(shù)量增強，凋亡指數(shù)為79.31±1.12，兩者AI比較其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，IPO組凋亡指數(shù)為58.90±2.75，且IPO組和IR組相比較凋亡細胞減少，AI下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但未降至SO組水平，二者AI比較差異亦