丁香葉乙醇提取物抗豬流感病毒的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬流感(swine influenza,SI)是由正黏病毒科豬流感病毒(swine influenza virus,SIV)引起的豬急性高度傳染性疾病。主要臨床癥狀表現(xiàn)為體溫升高、食欲不振、呼吸困難、咳嗽、流產(chǎn)以及延遲出欄等。SI一旦發(fā)生,將會給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失,尤其當與其它呼吸道疾病繼發(fā)或混合感染時,損失更是無法估量。SIV不僅可感染豬,同時也具有感染禽類和人、馬等其他哺乳動物的能力。而且豬可被禽流感病毒(Avian Influen

2、za Virus,AIV)和人流感病毒感染,是流感病毒新毒株產(chǎn)生的“孵育器”。SIV及豬的這些特征決定了它們在流感病毒的種間傳播中具有不可替代的地位。所以,SI除了其重要的獸醫(yī)衛(wèi)生學意義外,更重要的還在于其顯而易見的公共衛(wèi)生學意義。目前預防SI發(fā)生與傳播的最有效方式是疫苗接種,但是由于SIV亞型多,變異快,制備有效的疫苗困難重重,而抗流感病毒的化學合成藥物既有較強的毒副作用,又容易誘導病毒產(chǎn)生耐藥性。這種現(xiàn)狀下,在我國的中醫(yī)藥寶庫中尋找

3、有效藥物、研發(fā)新型制劑來防治SI就成為一項很有意義的研究工作。丁香葉是木犀科丁香屬植物朝鮮丁香(Syringa diatata Nakai)、洋丁香(Syringa vulgaris L.)或紫丁香(Syringa oblata Lindl)的干燥葉,具有廣譜的抗菌和抗病毒的作用,但尚未見有關丁香葉對SIV作用的研究報道。因此本試驗通過對丁香葉乙醇提取物體內外抗SIV的試驗研究及其對SIV感染小鼠血清中細胞因子的影響,闡明丁香葉抗SIV

4、作用和其可能的作用機理,為臨床防治SI提供理論依據(jù)。
   體外試驗首先采用細胞病變法(CPE)和噻唑藍(MTT)比色法測定丁香葉醇提物(EFFL)及陽性藥物金剛烷胺(AMA)對狗腎細胞(MDCK)的毒性,確定其半數(shù)有毒濃度(TC50)和最大無毒濃度(TC0),然后觀察丁香葉醇提物及金剛烷胺在不同作用方式下(先感染病毒后加藥、先加藥后感染病毒、感染病毒同時加藥、藥與病毒作用后再加)對SIVA/swine/Tianjing/14/

5、2009(H1N1)的體外抑制作用。結果顯示:丁香葉醇提物對MDCK細胞的TC0為250μg/mL, TC50為759.98±9.42μg/mL:金剛烷胺對MDCK細胞的TC0為31.3μg/mL,TC50為368.43±7.28μg/mL。在不同作用方式下給藥(先感染病毒后加藥、先加藥后感染病毒、感染病毒同時加藥、藥與病毒作用后再加),丁香葉醇提物的治療指數(shù)(TI)分別為13.52,6.82,15.76,16.30μg/mL。

6、   體內實驗首先驗證丁香葉醇提物對Balb/c小鼠的毒性,確定無毒濃度。然后通過鼻腔感染SIV,復制SIV Balb/c小鼠模型,并采取灌胃給藥的方式,觀察丁香葉醇提物對SIV感染小鼠的體重、肺指數(shù)、肺臟病毒滴度以及肺臟病理組織變化的影響,最后采用ELISA方法檢測小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10的水平,評價丁香葉醇提物抗SIV作用及其可能的作用機制。結果顯示:Balb/c小鼠對丁香葉醇提物的最大耐受濃度為10

7、00 mg/kg/d;丁香葉醇提物能明顯降低肺指數(shù)、肺臟病毒滴度、改善肺臟病理變化;豬流感病毒感染Balb/c小鼠后,感染模型組TNF-α,IL-6及IL-10的含量均高于正常對照組(P<0.05),IFN-γ的含量則有所下降(P<0.05)。與模型組相比,丁香葉醇提物可以明顯升高血清中IFN-γ、IL-10水平(P<0.05),降低TNF-α、IL-6水平(P<0.05)。綜上所述,丁香葉醇提物不僅具有很好的抗豬流感病毒的作用,而且可

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