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文檔簡介
1、鹽堿、干早、低溫和凍害等非生物逆境嚴重影響了植物的生長和發(fā)育。在逆境脅迫下,植物可啟動或增強兩類基因的表達以抵御不利環(huán)境的危害:1)基因編碼的產(chǎn)物為一些功能蛋白和酶類,如LEA,水通道蛋白,脯氨酸合成酶等。2)基因編碼的產(chǎn)物為傳遞信號和調(diào)控基因表達的轉(zhuǎn)錄因子,如MAP 激酶、bZIP、AP2/EREBP 轉(zhuǎn)錄因子等。由于植物基因的表達調(diào)控大多發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上,主要受控于順式元件和反式因子。特別是轉(zhuǎn)錄因子基因的表達可提高其下游一系列抗逆功
2、能基因的表達水平,從而提高植物的綜合抗逆性,在抗逆轉(zhuǎn)基因育種中具有重要功能價值,因此,分離和鑒定優(yōu)異的轉(zhuǎn)錄因子基因是當前抗逆分子生物學研究的重點。
本研究中,以野生長穗偃麥草(2 n=70)為材料,利用簡并引物和RACE 技術(shù),由RT-PCR 方法得到了一個由高鹽誘導的AP2/EREBP 類轉(zhuǎn)錄因子序列。首先根據(jù)GenBank中多種植物AP2/EREBP 轉(zhuǎn)錄因子氨基酸序列的保守區(qū)段設(shè)計了一對簡并引物,通過RT-PCR 擴
3、增出一條117 bp的cDNA片段。經(jīng)Blast 比較及測序驗證其正確性后,根據(jù)此片段序列設(shè)計3'端特異性引物,利用3'RACE 得到1080 bp的3'端cDNA片段,命名為EeAP2-1,GeneBank 注冊號為EU***005,該基因與水稻EREBP2(GeneBank Accession No1.:NM-001069787)同源性最高,達77%。通過半定量RT-PCR 方法分析了該基因在高鹽脅迫條件下轉(zhuǎn)錄表達情況。結(jié)果表明,在
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