1、磺胺類藥物(Sulfonamides)是一類含有對氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的化學合成抗菌藥物的總稱，被用于預防和治療人與動物的多種細菌感染性疾病，具有抗菌范圍廣、療效好、安全方便等優(yōu)點。其中，磺胺甲惡唑(SMZ)是一種被用來治療畜禽多種感染性疾病的廣譜抗菌藥，目前仍是醫(yī)學和獸醫(yī)學臨床上常用的磺胺類藥物，經(jīng)常和左氧氟沙星(LVFX)等喹諾酮類抗菌藥物聯(lián)合使用提高藥效。近幾十年來，已有部分磺胺類藥物被報道具有明顯的副作用，例如磺胺甲噻二唑(STZ)

2、、磺胺二甲基異惡唑(SIZ)、磺胺氯噠嗪(SCP)等。但因為磺胺類藥物性質(zhì)穩(wěn)定，價錢低廉，使用便利，仍被普遍應用于動物飼養(yǎng)和水產(chǎn)養(yǎng)殖，然而磺胺類藥物在體內(nèi)能被快速吸收，作用和代謝時間較長，容易造成磺胺藥物殘留，經(jīng)常食用會導致磺胺藥物在體內(nèi)蓄積，引起過敏、細菌耐藥性、致畸及致癌等，損害人體健康。人血清白蛋白(HSA)是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)之一，作為載體與各種內(nèi)源及外源物質(zhì)相結(jié)合，影響配體的吸收、轉(zhuǎn)運、分布和代謝過程。本文以HSA為模型，

3、采用多種光譜學方法結(jié)合分子模擬技術探索了3種磺胺類藥物與HSA的結(jié)合性質(zhì)及對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能的影響，并通過研究SMZ和LVFX單獨和同時存在時與HSA的結(jié)合機理，探討了SMZ與LVFX的協(xié)同作用。本研究對從分子水平上了解磺胺藥物在體內(nèi)的分布、轉(zhuǎn)運、代謝及毒性作用或藥理作用提供重要信息。
　　本文主要內(nèi)容如下：
　　1．簡單介紹了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、生理功能及生物學性質(zhì)，同時概述了小分子與蛋白質(zhì)相互作用的主要研究方法。
　　2．

4、應用熒光光譜、紫外吸收光譜、圓二色譜和傅里葉紅外光譜等方法，研究了人體生理條件下(pH7.4) STZ與HSA的相互作用。熒光滴定結(jié)果表明，STZ通過氫鍵和范德華力與HSA形成復合物使HSA熒光發(fā)生靜態(tài)猝滅，結(jié)合常數(shù)Ka達到105 L·mol-1，表明STZ與HSA有較強的親合力，STZ在HSA上只有一個結(jié)合位點，結(jié)合于HSA亞結(jié)構(gòu)域IIA(Site I位)。紫外吸收、同步熒光、表面疏水性實驗、三維熒光、圓二色譜和傅里葉紅外光譜分析表明

5、，STZ與HSA相結(jié)合，誘導了HSA的部分二級結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，使HSA表面疏水性增加，蛋白質(zhì)α?螺旋和β?轉(zhuǎn)角含量增加，β?折疊和無規(guī)則卷曲含量降低。
　　3．聯(lián)合采用多種光譜方法及分子模擬技術，在人體酸度(pH7.4)條件下，測定了SIZ、SCP與HSA相互作用的結(jié)合模式及對HSA結(jié)構(gòu)功能的影響。熒光猝滅結(jié)果表明，SIZ和SCP主要通過氫鍵和范德華力與HSA形成復合物，使HSA熒光發(fā)生靜態(tài)猝滅，SIZ與HSA的親和力大于SCP。

6、位點競爭標記實驗表明， SIZ、SCP在HSA上只有一個結(jié)合位點，即Site I位，分子模擬證實了上述結(jié)果。紫外、同步熒光、三維熒光、圓二色譜和紅外光譜分析以及蛋白質(zhì)表面疏水性測定顯示，二者與HSA的結(jié)合，導致HSA的部分二級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，多肽鏈部分伸展，結(jié)構(gòu)松散，使α?螺旋含量降低，HSA表面疏水性降低。SIZ和SCP與HSA結(jié)合后，使HSA構(gòu)象型態(tài)轉(zhuǎn)變符合“二態(tài)模型”，其中SIZ誘導HSA結(jié)構(gòu)變化的程度強于SCP。
　　4．在

7、模擬人體生理酸度條件下(pH7.4)，運用熒光、紫外和分子模擬技術，研究了SMZ、LVFX的協(xié)同作用。實驗結(jié)果表明，SMZ和LVFX均主要通過氫鍵和疏水作用與HSA發(fā)生相互作用形成復合物，導致HSA的內(nèi)源熒光發(fā)生靜態(tài)猝滅。SMZ和LVFX在HSA上的主要結(jié)合位點均位于同一位點，site I位， LVFX與HSA的結(jié)合能力大于SMZ，二者共存分別小于二者單獨與HSA的結(jié)合能力。同步熒光、圓二色譜及蛋白質(zhì)表面疏水性測定顯示，SMZ、LVFX