1、白僵蠶是蠶蛾科家蠶幼蟲(chóng)感染病原白僵茵后致死的干燥菌蟲(chóng)體，作為中藥材首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是我國(guó)名貴的傳統(tǒng)中藥材，利用歷史悠久。白僵蠶性平，味咸、辛（《本經(jīng)》），具有抗驚厥、抗凝、催眠、抑菌、抗癌、降糖、降脂等藥理作用。臨床上，白僵蠶使用單方或與其他中藥配伍，主要用于外感發(fā)熱、驚厥、癲癇、抽搐、頭痛、偏頭痛、面癱、偏癱、咳嗽、哮喘、剝脫性皮炎、皮膚瘙癢癥、失眠、甲狀腺瘤、糖尿病、蕁麻疹、腦血栓形成、高血脂癥等十幾種疾病治療。目前白僵蠶藥用

2、十分廣泛，并常年出口外銷(xiāo)。白僵蠶具有的眾多藥理作用，與其富含的功能活性成分直接相關(guān)。黃酮類(lèi)化合物、白僵菌素、多糖作為白僵蠶的重要功能活性成分，其提取與檢測(cè)、含量變化、組成與結(jié)構(gòu)、藥理作用及其機(jī)理等沒(méi)有得到較深入研究。本論文對(duì)此進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下:
　　 1、利用CCD響應(yīng)面方法對(duì)白僵蠶中黃酮類(lèi)化合物的提取進(jìn)行了優(yōu)化，建立了白僵蠶粉過(guò)80目篩，以80％乙醇為提取溶劑，30∶1的液料比，超聲波處理20min，在100℃回流提取

3、2.5h，為白僵蠶中黃酮類(lèi)化合物的最佳提取方案。建立了分光光度法測(cè)定白僵蠶中黃酮類(lèi)化合物的方法，該方法精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性的標(biāo)準(zhǔn)差均在2％以內(nèi)，回收率在95-105％范圍內(nèi)。利用建立的檢測(cè)方法，查明了5齡起蠶感染白僵菌后12天內(nèi)體內(nèi)黃酮類(lèi)化合物含量的變化規(guī)律。
　　 2、利用HPLC-MS/MS方法，確定了白僵蠶體內(nèi)白僵菌素含量的檢測(cè)方法，測(cè)得白僵菌素含量為21.64μg/g，方法學(xué)檢測(cè)最低檢測(cè)限與最低定量限分別為4μg/g和

4、12μg/g，重現(xiàn)性(RSD=1.16％)與3個(gè)水平的回收率（109±4.9％，97±3.8％，92±3.4％）均達(dá)到了較滿意水平。利用建立的檢測(cè)方法，查明了五齡起蠶感染白僵菌后12天內(nèi)白僵菌素含量的變化情況。
　　 3、采用陰離子交換層析（DEAE Sepharose F.F.）和凝膠柱層析（Sephacryl S系列材料），對(duì)白僵蠶多糖進(jìn)行分離純化。經(jīng)DEAE Sepharose F.F.獲得1個(gè)蒸餾水洗脫的中性多糖組分BB

5、PW，3個(gè)不同濃度NaCl溶液洗脫的酸性多糖組分BBPS-1、BBPS-2、BBPS-3。進(jìn)一步用Sephacryl S分離BBPW獲得2個(gè)中性均一組分BBPW-1和BBPW-2，紫外掃描檢測(cè)二者均不含蛋白質(zhì)和核酸。紅外光譜檢測(cè)BBPW-2含有糖的特征吸收峰。高效液相色譜檢測(cè)BBPW-1和BBPW-2為均一組分，BBPW-1分子量為3.67×106 Da，是一種高度聚合的大分子多糖，BBPW-2的分子量為2.0×103 Da，是一種寡聚

6、糖。
　　 4、對(duì)分離得到的均一組分BBPW-2進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。利用單糖組成分析、甲基化分析、部分酸水解、核磁共振(NMR)技術(shù)（一維:1HNMR，13C NMR，二維:1H-1H COSY譜、TOCSY譜、HMQC譜、NOESY譜和HMBC譜），對(duì)BBPW-2的單糖組成、糖殘基個(gè)數(shù)、糖殘基連接方式、構(gòu)型、連接順序等進(jìn)行了研究。單糖組成分析結(jié)果顯示，BBPW-2含有甘露糖、葡萄糖、半乳糖，比例為1∶0.74∶0.59;甲基化分析

7、結(jié)果顯示，BBPW-2含有的甘露糖、葡萄糖、半乳糖這三種單糖摩爾比為1∶0.75∶0.47，二者比例基本保持一致。甲基化分析結(jié)果同時(shí)表明，BBPW-2殘基種類(lèi)較多，結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，其中甘露糖存在多種連接方式，主要為1位端基連接方式，其次為1，2，6-連接方式，還有少量的1，3-連接方式;葡萄糖主要為1，2，6-連接，還有少量的1位端基連接;半乳糖主要以1，2-連接。NMR分析結(jié)果顯示，BBPW-2的結(jié)構(gòu)是以β-D-1，2，6-葡萄糖和β-

8、D-1，2，6-甘露糖為主鏈、以α-D-1，2-半乳糖和α-D-1，3-甘露糖為支鏈、α-D-甘露糖和β-D-葡萄糖為端基所組成寡聚糖。
　　 5、考察了白僵蠶多糖對(duì)正常小鼠和環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制小鼠免疫功能的影響。發(fā)現(xiàn)白僵蠶多糖可提高小鼠的免疫器官重量、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、血清中溶血素抗體水平和脾空斑形成細(xì)胞數(shù)量，結(jié)果表明白僵蠶多糖可從多方面增強(qiáng)正常小鼠和免疫抑制小鼠的免疫功能。
　　 6、AB-8

9、大孔樹(shù)脂和聚酰胺樹(shù)脂聯(lián)用，以60％乙醇洗脫，對(duì)白僵蠶黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行了制備，并考察了黃酮類(lèi)化合物對(duì)人宮頸癌細(xì)胞He(l)a和人胚胎腎細(xì)胞HEK293增殖的影響。結(jié)果表明，白僵蠶黃酮類(lèi)化合物對(duì)He(l)a細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，對(duì)HEK293有促進(jìn)增殖的作用。
　　 7、考察了由超濾法分級(jí)得到的3個(gè)不同分子量多糖的體外抗癌作用。結(jié)果表明，按分子量分級(jí)法無(wú)法有效篩選出抗癌(He(l)a)明顯卻對(duì)正常細(xì)胞（HEK293）殺傷較小的組

10、分。由陰離子交換柱分離到的4個(gè)多糖組分（包括1個(gè)中性多糖BBPW,3個(gè)酸性多糖BBPS-2、BBPS-2、BBPS-3）對(duì)人宮頸癌He(l)a細(xì)胞、人肝癌HepG2細(xì)胞有明顯的抑制作用，其中中性多糖組分BBPW抑制作用最為明顯，大于另外3個(gè)酸性多糖BBPS-1、BBPS-2、BBPS-3的抑制作用。另外考察了這4個(gè)多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7）的影響，結(jié)果顯示4個(gè)組分均能明顯促進(jìn)RAW264.7產(chǎn)生NO，并對(duì)其增殖有一定的促進(jìn)作

11、用。結(jié)果表明，白僵蠶多糖在體內(nèi)的抗癌作用的發(fā)揮可能是通過(guò)增強(qiáng)吞噬細(xì)胞功能來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　 8、考察了從白僵蠶中性多糖組分BBPW分離出的兩個(gè)均一組分BBPW-1和BBPW-2的抗癌作用，結(jié)果顯示二者對(duì)He(l)a、HepG2抑制作用明顯，其中大分子量的BBPW-1抑制作用稍微強(qiáng)于BBPW-2。另外還發(fā)現(xiàn)，BBPW-2對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7有長(zhǎng)期抑制作用。通過(guò)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期檢測(cè)表明，BBPW-2對(duì)He(l)a細(xì)胞的抑制作用是