1、L-型鈣離子通道(L-type calcium channels，LTCCs)介導(dǎo)并調(diào)控Ca2+進入細胞，對心肌細胞的正常生理功能有重要的意義。LTCCs主要分布于肌纖維膜上，能夠被去極化電壓所激活，同時內(nèi)流的Ca2+則能引起通道失活關(guān)閉。L-型鈣離子電流(L-type calcium current，ICa-L)不僅在心肌的興奮-收縮耦聯(lián)中起著極為重要的作用，同時參與心肌動作電位的形成和維持并與心律失常的發(fā)生有關(guān)。鈣通道阻滯劑能夠抑制

2、心肌細胞Ca2+內(nèi)流，降低細胞內(nèi)鈣，減弱心肌收縮力，降低心肌氧耗量，在臨床上可用于高血壓，冠心病，急性左心衰等病癥。
　　慢激活延遲整流鉀電流(the slowly activating delayed rectifierpotassium current，IKs)和快激活延遲整流鉀電流（the rapidly activatingdelayed rectifier potassium current，IKr）在心肌動作電位的復(fù)極

3、化過程中發(fā)揮重要作用。當電學(xué)重構(gòu)或基因突變導(dǎo)致IKs和IKr通道功能異常時，將引起K+外流減少，使心肌復(fù)極減慢，動作電位延長，產(chǎn)生Q-T間期延長綜合征(Long QT syndrome，LQTS)，表現(xiàn)為心電圖Q-T間期延長并發(fā)生惡性心律失常性暈厥及猝死。IKs和IKr抑制劑則可能導(dǎo)致Q-T間期延長而引發(fā)心律失常。
　　丹參(Salvia miltiorrhiza)在中國有幾千年的臨床應(yīng)用歷史，它被廣泛用于治療高血壓，冠心病，心肌

4、梗塞，血液循環(huán)疾病和其他的心血管疾病。越來越多的研究表明，丹參主要的水溶性成分為丹參酸A(SalvianicacidA，SAA)，具有多種藥理學(xué)活性，如抗炎和抗腫瘤，神經(jīng)和心肌保護作用，提高免疫力等。在前期的工作中，我們發(fā)現(xiàn)丹參注射液可以阻斷LTCCs，SAA作為丹參注射液主要的成分之一，可能是丹參注射液阻斷LTCCs發(fā)揮心肌保護作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　目的:本研究主要探討了SAA心臟保護作用的機制。通過電生理膜片鉗技術(shù)觀察SAA對

5、大鼠心室肌細胞LTCCs以及HEK293細胞上表達的KCNQ1/KCNE1、hERG通道電流的調(diào)控作用，通過IonOptix測量系統(tǒng)觀察SAA對大鼠心室肌細胞收縮力的影響。
　　方法:
　　(1)成年大鼠心室肌細胞分離成年雄性Sprague-Dawley大鼠麻醉后開胸取出心臟進行急性分離，心臟在Langendorff裝置上用含0.02％膠原酶Ⅱ的無鈣臺氏液在37℃下進行酶解消化。酶消化完畢后自左心室分段剪取心室肌組織放入盛有

6、Kreb's（KB液）的試管中輕輕吹打使之分散成單個細胞。單個心肌細胞通過200目尼龍網(wǎng)過濾收集，收集的心室肌細胞在室溫下靜置于KB液中1小時后逐漸增加KB液中Ca2+濃度直到1.8mM。而大鼠缺血性心室肌細胞則通過對大鼠尾靜脈注射垂體后葉素誘導(dǎo)心肌缺血10分鐘后參照正常大鼠心肌細胞分離方法準備。所分離的心室肌細胞需在分離后6小時內(nèi)進行實驗。全細胞膜片鉗技術(shù)記錄SAA對ICa-L及其動力學(xué)過程的影響。
　　(2)細胞培養(yǎng)HEK29

7、3細胞系在37℃，5％ CO2和95％空氣條件下常規(guī)培養(yǎng)，并每隔1-2天進行細胞傳代。HEK293細胞需要經(jīng)過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染才能表達人心臟KCNQ1/KCNE1(IKs)鉀離子通道。表達hERG通道(IKr)的HEK293為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株培養(yǎng)后可直接用于膜片鉗實驗。穿孔膜片鉗技術(shù)記錄SAA對IKs和IKr及其動力學(xué)過程的影響。
　　(3)細胞收縮測定成年雄性Sprague-Dawley大鼠心臟進行急性分離，用經(jīng)典酶解法分離得到單個心室

8、肌細胞。所分離的心室肌細胞需在分離后6小時內(nèi)進行實驗。細胞收縮與離子濃度同步測量系統(tǒng)則用于檢測分離的成年大鼠心肌收縮力。
　　結(jié)果:
　　1、心室肌細胞ICa-L的鑒定
　　將細胞膜鉗制于-80 mV，采用不同程度的去極化(-60-+60 mV，Δ10mV)激活I(lǐng)Ca-L。結(jié)果顯示ICa-L能夠被特異性鈣通道阻斷劑維拉帕米幾乎完全阻斷(P＜0.05)。
　　2、SAA對心室肌細胞ICa-L的抑制作用
　　3

9、×10-4 M SAA可顯著抑制心室肌細胞ICa-L，抑制率為35.5±0.9％。細胞外液沖洗后ICa-L可部分恢復(fù)到用藥前水平（19.8±2.7％）(n=5)。
　　3、SAA對心室肌細胞ICa-L作用的量效關(guān)系
　　結(jié)果顯示，SAA可濃度依賴性抑制ICa-L。3×10-6、10-5、3×10-5、10-4和3×10-4 M SAA對ICa-L的抑制率分別為9.5±0.9％、21.0±2.1％、29.6±1.8％、34.6

10、±1.9％和39.5±1.9％(n=5)。
　　4、SAA對心室肌細胞ICa-L的電流-電壓(Ⅰ-Ⅴ)關(guān)系曲線的作用
　?、?Ⅴ關(guān)系曲線隨SAA濃度增加而逐步上移，表明SAA濃度依賴性地抑制ICa-L，但對激活電位，峰電位和翻轉(zhuǎn)電位無顯著性改變。
　　5、SAA對心室肌細胞ICa-L穩(wěn)態(tài)激活曲線和失活曲線的影響
　　SAA對心室肌細胞ICa-L穩(wěn)態(tài)激活和失活無明顯作用。0、3×10-6、3×10-5、3×10-4

11、MSAA作用后心室肌細胞ICa-L激活曲線半最大激活電壓(V1/2)/斜率因子(k)分別為:-10.40±0.64 mV/7.03±0.58;-9.53±0.69mV/6.99±0.62;-8.16±0.69 mV/6.99±0.61;-8.61±0.69 mV/6.88±0.61(P＞0.05，n=5)。0、3×10-6、3×10-5、3×10-4 M SAA作用后心室肌細胞ICa-L失活曲線V1/2/k分別為:-32.03±0.15

12、 mV/4.62±0.13;-31.34±0.08mV/4.84±0.08;-30.75±0.01 mV/4.98±0.01;-30.94±0.02 mV/5.08±0.02(P＞0.05，n=5)。
　　6、SAA對缺血性心室肌細胞ICa-L的作用
　　3×10-4 M SAA可使缺血性心肌細胞ICa-L抑制35.2±0.5％(P＜0.05，n=5)，結(jié)果與正常細胞一致。
　　7、SAA對IKs的影響
　　結(jié)果

13、顯示3×10-4 M SAA對IKs沒有顯著性的作用2.68±0.9％(P=NS，n=6)。
　　8、SAA對IKr的影響
　　結(jié)果顯示3×10-4 M SAA對IKr沒有顯著性的作用3.80±0.5％(P=NS，n=6)。
　　9、SAA對心室肌細胞收縮的抑制作用
　　3×10-7和10-6 M SAA均可顯著抑制心室肌細胞收縮力，抑制率分別為33.48±0.75％(P＜0.05,n=5),92.98±0.48