粘紅酵母（Rhodotorula glutinis）CIBAS A1401苯丙氨酸解氨酶（PAL）的分離純化與性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中科院成都生物研究所楊順楷研究員從滇西某芒果園土樣內(nèi)分離純化得到的紅酵母(Rhodotorula sp.)CIBAS A1401經(jīng)鑒定為粘紅酵母(Rhodotorula glutinis).因其較高的PAL酶活已用作L-Phe的生產(chǎn)菌株.為提高PAL的酶活和穩(wěn)定性,更好地利用該菌株生產(chǎn)L-Phe,該工作對粘紅酵母CIBAS A1401 PAL進行了純化,且對其酶學性質(zhì)作了較深入的研究.經(jīng)麥芽汁培養(yǎng)基活化后的粘紅酵母CIBAS A1401

2、,于誘導培養(yǎng)基中進行二級發(fā)酵.利用PAL能轉化t-Ca為L-Phe的性質(zhì),篩選出酶活最高的第37號菌株作為出發(fā)菌株,經(jīng)48h一級培養(yǎng)和21h二級培養(yǎng)后的菌體收集于50mL帶螺旋帽的離心管中.加入兩倍體積直徑為0.5mm的玻璃珠,在漩渦振蕩器上充分破壁.粗酶液經(jīng)40﹪~65﹪硫酸銨細末分級沉淀,復溶后,先后于Sepharose 4B凝膠過濾柱和DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱分離純化,得到的蛋白質(zhì)樣品于聚丙烯酰胺

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