1、目的：
　　(1)研究三七總皂苷(Panax notoginseng saponins，PNS)對(duì)體外培養(yǎng)K562細(xì)胞增殖、凋亡、周期及相關(guān)信號(hào)蛋白表達(dá)的影響。
　　(2)研究三七總皂苷體外作用K562細(xì)胞后對(duì)mTOR信號(hào)通路活性的影響。
　　(3)研究三七總皂苷聯(lián)合柔紅霉素對(duì)體外培養(yǎng)K562細(xì)胞增殖的影響。
　　方法：
　　(1)體外培養(yǎng)K562細(xì)胞，繪制其生長(zhǎng)曲線。不同濃度的PNS(0～800μg/mL

2、)干預(yù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞24h、48h及72h后，MTT比色法檢測(cè)PNS作用后K562細(xì)胞的增殖變化； PNS(100μg/mL，200μg/mL及400μg/mL)干預(yù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞后，AO/EB雙熒光染色后使用熒光顯微鏡觀察對(duì)照組及加藥組細(xì)胞死亡及凋亡的形態(tài)變化；Annexin V-FITC/PI雙染色后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)照組及加藥組細(xì)胞的凋亡率；PI單染后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)照組及加藥組細(xì)胞周期的變化；蛋白印跡檢

3、測(cè)對(duì)照組及加藥組細(xì)胞cleaved caspase-3、cyclin D1、Fas蛋白表達(dá)量的變化。
　　(2) PNS(100μg/mL，200μg/mL及400μg/mL)干預(yù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)72h后，使用RT-PCR法檢測(cè)mTOR、p70S6K以及4E-BP1的mRNA表達(dá)情況；蛋白印跡法檢測(cè)mTOR、p-mTOR(Ser2448)、p70S6K、p-p70S6K(Thr229/389)、4E-BP1、p-4E-BP1

4、(Thr37/46)的蛋白表達(dá)量。
　　(3)柔紅霉素(DNR)(0～1.0μg/mL)單獨(dú)作用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞24h、48h及72h后，MTT比色法檢測(cè)DNR對(duì)K562細(xì)胞增殖的抑制作用。PNS聯(lián)合低濃度DNR作用于體外培養(yǎng)K562細(xì)胞48h時(shí)間后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖變化，AO/EB雙熒光染色后使用熒光顯微鏡觀察對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞死亡及凋亡的形態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　(1)在濃度為100～800μg/m

5、L時(shí)，PNS對(duì) K562細(xì)胞有增殖抑制作用(P<0.05)，并呈現(xiàn)作用時(shí)間及藥物濃度依賴性，當(dāng)作用時(shí)間為72h，PNS的IC50為(229.07±2.36)μg/mL。與對(duì)照組相比，100～400μg/mL PNS作用于K562細(xì)胞48h后，細(xì)胞凋亡率增加(P<0.05)，并且G0/G1期細(xì)胞增多(P<0.05)，而G2、S期細(xì)胞減少(P<0.05)，cleaved caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，cyclin D1蛋白

6、表達(dá)下降(P<0.05)，F(xiàn)as蛋白表達(dá)無明顯變化。
　　(2)與對(duì)照組相比，100～400μg/mL PNS作用于K562細(xì)胞72h后，mTOR mRNA表達(dá)量降低(P<0.05)，mTOR蛋白表達(dá)下降(P<0.05)，p70S6K及4E-BP1蛋白表達(dá)無明顯變化，磷酸化蛋白p-mTOR(Ser2448)、p-p70S6K(Thr229/389)和 p-4E-BP1(Thr37/46)的表達(dá)量下降(P<0.05)。
　　(

7、3) DNR(0.0625～1.0μg/mL)能夠明顯抑制K562細(xì)胞的增殖。PNS與DNR聯(lián)合作用后能提高其對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制率。
　　結(jié)論：
　　(1) PNS能夠抑制K562細(xì)胞增殖，促進(jìn)K562細(xì)胞凋亡，上調(diào)cleaved caspase3蛋白表達(dá)，并使其發(fā)生周期阻滯，下調(diào)cyclin D1蛋白表達(dá)。
　　(2) PNS使K562細(xì)胞mTOR信號(hào)通路活性降低，mTOR蛋白表達(dá)下調(diào)，mTOR、p70S6K和