1、本論文以草魚(Ctenopharyngodon idellus)為研究對象,對其NCCRP-1和IL-10基因進(jìn)行克隆、表達(dá)。通過提取草魚頭腎總RNA,應(yīng)用同源性克隆和RACE-PCR方法獲得NCCRP-1和IL-10基因全長cDNA序列,并對其進(jìn)行原核表達(dá)分析。
　　 草魚NCCRP-1基因cDNA全長為900 bp,完整開放閱讀框(ORF)為714bp,編碼237個氨基酸,5’非編碼區(qū)為3 bp,3’非編碼區(qū)為183 bp。

2、草魚NCCRP-1基因與鯉魚(Crprinus carpio L.)的同源性較高,為88％；與哺乳動物的同源性較低。構(gòu)建了NCCRP-1和pET-32a載體的重組表達(dá)質(zhì)粒,重組蛋白主要以包涵體形式存在；通過HisTrap HP柱子純化重組蛋白,Western blot分析表明成功表達(dá)出目的蛋白,NCCRP-1重組蛋白分子量為47.8 kDa。制備了兔抗NCCRP-1表達(dá)蛋白血清,ELISA測定其效價為1:40000;用免疫組織化學(xué)方法檢

3、測到NCCRP-1在頭腎和脾臟組織細(xì)胞中主要分布在胞漿內(nèi)。
　　 草魚IL-10基因cDNA全長為1365 bp,完整開放閱讀框(ORF)為540 bp,編碼179個氨基酸,5’非編碼區(qū)為274 bp,3’非編碼區(qū)為501 bp；草魚IL-10基因與鰱魚(Hypophthal michthys molitrix)的同源性較高,為99％；與哺乳動物的同源性較低。構(gòu)建了IL—10和pET-32a載體的重組表達(dá)質(zhì)粒,重組蛋白主要以包涵

4、體形式存在;通過HisTrap HP柱子純化重組蛋白,Western blot分析表明成功表達(dá)出目的蛋白,IL-10重組蛋白分子量為41.5 kDa。制備了兔抗IL-10表達(dá)蛋白血清,ELISA測定其效價為1:40000；用免疫組織化學(xué)方法檢測到IL-10在頭腎和脾臟組織細(xì)胞中主要分布在胞漿內(nèi)。
　　 本研究為草魚疾病防治提供了一定的理論依據(jù),豐富和發(fā)展了魚類分子免疫學(xué)的研究內(nèi)容,為進(jìn)一步研究NCCRP-1和IL-10蛋白的生物