青霉T24-2木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的分離純化及其部分酶學性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗室篩選到一株產(chǎn)纖維素酶和木聚糖酶菌株,青霉(Penicillium sp.)T24-2。液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)96h后,發(fā)酵液離心去除菌體和殘渣,粗酶液采用(NH4)2SO4分級沉淀、Sephadex G-25層析、Sephadex G-75凝膠過濾層析、Sephadex G-200凝膠過濾層析、DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析等步驟,分離純化出青霉T24-2中達到電泳純的β-葡萄糖苷酶和2種木聚糖酶XYN-1,

2、XYN-2。 XYN-1被純化了3.8倍,比活由37.5 U/mg上升到144.2 U/mg;XYN-2被純化了5.4倍,比活由37.5U/mg上升到202.5U/mg;β-葡萄糖苷酶則被純化20.6倍,比活由26.5 U/mg上升到546.7 U/mg。通過SDS-PAGE電泳測得木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶酶組分亞基的相對分子量分別為43.7kD,20.7kD和140.0kD。木聚糖酶XYN-1和XYN-2的最適反應(yīng)pH分別為

3、pH5.5,pH4.5,最適反應(yīng)溫度分別為70℃和50℃,最穩(wěn)定的pH分別為pH4和pH5,兩種木聚糖酶均在30℃-40℃下處理30 min后比較穩(wěn)定。β-萄糖苷酶的最適反應(yīng)pH為pH3.5,最適反應(yīng)溫度為70℃,最穩(wěn)定的pH為pH4.5,在30℃~50℃之間比較穩(wěn)定。在反應(yīng)體系金屬離子和化合物的終濃度均為5mmol/L條件下,ZnSO4和MgCl2對木聚糖酶XYN-1酶活有激活作用,而MgCl2則對XYN-2酶活有一定的抑制作用。Mn

4、SO4對木聚糖酶XYN-1酶活有強烈的抑制作用,但是對于XYN-2,MnSO4卻起到了激活作用。SDS對兩種木聚糖酶都有強烈的抑制作用。NiCl2和ZnSO4對B-葡萄糖苷酶酶活有激活作用,而FeSO4,MgCl2,MnSO4則對β-葡萄糖苷酶有較強的抑制作用。 實驗過程中發(fā)現(xiàn),對稻草粉不進行預處理和進行預處理兩種情況下,青霉T24-2菌株液態(tài)發(fā)酵能夠產(chǎn)生更高濃度的胞外蛋白。另外,該菌株能以尿素為氮源表達CMC酶活和木聚糖酶酶

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