1、游離三碘甲腺原氨酸(free3，5，3’-triiodothyronine，F(xiàn)T3)是甲狀腺激素之一，因濃度不受結(jié)合蛋白的影響，可以直接反應(yīng)甲狀腺功能，檢測(cè)人血清中的FT3是診斷甲狀腺功能亢進(jìn)的直接指標(biāo)。但是目前，臨床檢測(cè)FT3仍依賴于進(jìn)口儀器和試劑，價(jià)格昂貴，制約了其應(yīng)用范圍。
　　目的：
　　制備T3完全抗原，將其免疫大白兔，制備抗人T3多克隆抗體，應(yīng)用異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate

2、，F(xiàn)ITC)系統(tǒng)開(kāi)發(fā)新型非均衡競(jìng)爭(zhēng)技術(shù)，建立一種能廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)FT3的方法，并進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)；用制備的T3完全抗原免疫Balb/c小鼠，制備T3單克隆抗體，為進(jìn)一步建立人血清T3檢測(cè)方法以及研究T3的生物學(xué)作用提供基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、應(yīng)用碳二亞胺法將T3純品分別與牛血清白蛋白、牛血清γ球蛋白偶聯(lián)，制備完全抗原。
　　2、以T3-牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)為抗原免疫新西

3、蘭大白兔，制備抗人T3多克隆抗體。
　　3、用辣根過(guò)氧化物酶(horse radish peroxidase，HRP)標(biāo)記自制的抗人T3多克隆抗體，用FITC標(biāo)記T3類似物-BGG。采用抗FITC抗體包被發(fā)光板，F(xiàn)ITC-BGG-T3類似物與抗FITC抗體結(jié)合形成固相抗原，通過(guò)非均衡競(jìng)爭(zhēng)法原理，固相抗原與血清中FT3競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗T3抗體-HRP，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算FT3濃度，建立方法學(xué)評(píng)價(jià)并與直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine

4、serum gamma globulin，BGG)包被(非FITC系統(tǒng))的檢測(cè)系統(tǒng)相比較。將本方法應(yīng)用于臨床120份血清標(biāo)本的檢測(cè)，定量結(jié)果與Roche2010電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)(Elecsys2010)定量結(jié)果進(jìn)行比較。
　　4、以T3-牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)為抗原免疫Balb/c小鼠，以50％的聚乙二醇為融合劑將免疫后小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)克隆化、有限稀釋篩選，建立

5、能穩(wěn)定表達(dá)抗T3的雜交瘤細(xì)胞株，并通過(guò)小鼠體內(nèi)誘生法制備大量的單克隆抗體。純化制備的單克隆抗體，并從純度、效價(jià)、亞型等方面對(duì)其進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果：
　　1、抗體經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)證明對(duì)T3具有高度特異性。
　　2、應(yīng)用FITC系統(tǒng)建立的非均衡競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光免疫分析標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性R>0.99，線性范圍0.25～50 pg/mL，分析靈敏度為0.25 pg/mL，精密度測(cè)試批內(nèi)、批間變異系數(shù)CV<5％，檢測(cè)結(jié)果優(yōu)于非FIT

6、C系統(tǒng)的檢測(cè)。對(duì)于臨床血清標(biāo)本的檢測(cè)，其定量結(jié)果與Roche Elecsys2010定量試劑盒的定量結(jié)果具有很好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)R=0.9622，兩者的測(cè)定值無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　3、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，建立了2株能穩(wěn)定分泌抗T3單克隆抗體的細(xì)胞株，將其中一株細(xì)胞株注射入小鼠腹腔，制備了富含抗T3單克隆抗體腹水。純化后抗體的效價(jià)為1:32000，屬于IgG1型。
　　結(jié)論：
　　1、應(yīng)用偶聯(lián)技術(shù)成功制備了T