1、目的：
　　 肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae，MP)是人類支原體性肺炎的病原菌，近年來其感染表現(xiàn)為肺外并發(fā)癥多樣，難治性肺炎病例增多，其具體致病機(jī)制目前尚不明確。臨床治療MP感染的首選藥物是大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，然而MP23SrRNA基因突變會導(dǎo)致大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥，國內(nèi)外報道，MP耐藥基因突變株不斷增多，我國北京地區(qū)MP耐藥基因檢出率甚至高達(dá)90％。然而體外藥物敏感性試驗(yàn)的結(jié)果不能代表藥物體內(nèi)真實(shí)的治療效

2、果，而且由于肺炎支原體分離培養(yǎng)困難，目前MP對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的體外敏感性試驗(yàn)并不是臨床常規(guī)檢測項(xiàng)目。學(xué)者們建立了各種耐藥基因突變檢測方法，希望可以應(yīng)用于臨床肺炎支原體耐藥性檢測。本實(shí)驗(yàn)旨在通過分析大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果，評價進(jìn)行MP耐藥基因檢測的臨床意義，并通過MP感染的大鼠模型探討MP致病的免疫學(xué)機(jī)制，以期為臨床治療肺炎支原體感染提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.MP感染的臨床治療分析。選

3、取符合納入條件的66例疑為支原體肺炎的住院患者，男33例，女33例，采集患者肺泡灌洗液、痰及咽拭子標(biāo)本，PCR方法進(jìn)行MP DNA檢測及包含有突變位點(diǎn)的933bp片段擴(kuò)增，擴(kuò)增片段進(jìn)行核酸序列測定。結(jié)合病歷資料，選擇病人發(fā)熱天數(shù)、住院天數(shù)、使用激素及并發(fā)癥出現(xiàn)情況做為分析指標(biāo)，對耐藥基因突變株與非突變株進(jìn)行比較，分析大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果。
　　 2.MP免疫學(xué)致病機(jī)制研究。45只大鼠隨機(jī)分為感染組2

4、5只，對照組20只，感染組在無菌操作臺經(jīng)鼻連續(xù)4天接種100μ l(106CFU/ml)MP，對照組同樣條件下經(jīng)鼻連續(xù)4天接種100μlMP液體培養(yǎng)基。接種完成后1、3、5、8、10天時，分批處死感染組和對照組大鼠，采集肺泡灌洗液和肺組織。采用熒光定量PCR方法測定大鼠肺泡灌洗液中MP DNA含量，ELISA方法檢測肺泡灌洗液Th1/Th2類細(xì)胞因子，對大鼠肺組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色后進(jìn)行肺組織病理學(xué)評分。分析大鼠感染MP后肺泡灌洗液中Th

5、1、Th2類細(xì)胞因子的動態(tài)變化，研究MP感染與機(jī)體免疫系統(tǒng)間的相互作用，了解其致病機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.66例病人中46例病人MP DNA陽性，20例為陰性，肺泡灌洗液、痰液、咽拭子NIP分離率分別為69.7％、18.2％、6.1％，肺泡灌洗液分離率高于痰液和咽拭子(P<0.01)；46份MPDNA樣品中有31份存在耐藥基因突變，突變率為67.4％(31/46)，均為2063A→G突變，并未發(fā)現(xiàn)其它位點(diǎn)突變；耐

6、藥基因突變株(macrolide-resistant，MR)與非突變株(macrolide-susceptible，MS)病人的發(fā)熱天數(shù)、住院天數(shù)、激素使用及并發(fā)癥出現(xiàn)情況均無統(tǒng)計學(xué)差異(P值分別為0.459、0.632、0.793、0.575)。
　　 2.感染組大鼠造模后第三天炎癥達(dá)到最重，肺組織病理評分為14.7(最高分為16分)，第五天炎癥評分有所下降，病理評分為9.7分，對照組無明顯病理改變，感染組熒光定量PCR在整個

7、過程中均能檢測到MP，且MP DNA含量相對穩(wěn)定，天間相比并無統(tǒng)計學(xué)差異；大鼠Th1類細(xì)胞因子IFN-γ在感染MP后升高，第3天達(dá)到峰值，且IFN-γ的水平與肺組織病理學(xué)評分呈正相關(guān)(R=0.900，P<0.05)，而Th2細(xì)胞因子IL-4在感染后并無明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 本研究結(jié)果表明：MP大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因突變檢出率為63.4％，均為2063A→G突變；肝耐藥基因突變株與非突變株病人在發(fā)熱天數(shù)、住院天數(shù)、激

8、素使用情況及并發(fā)癥情況上均無差別，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的治療效果可能與其抑制細(xì)菌蛋白合成外的免疫調(diào)節(jié)活性有關(guān)，因此建議臨床不必常規(guī)開展MP耐藥基因檢測；MP耐藥不導(dǎo)致患者病程延長及并發(fā)癥增多，因此推測本身攜帶耐藥基因可能不是導(dǎo)致難治性MP肺炎的主要原因，具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究；MP感染大鼠后促進(jìn)炎癥的Th1類細(xì)胞因子升高，且其濃度與肺組織病理評分具有相關(guān)性，而起抗炎作用的Th2類細(xì)胞因子并無明顯變化，大鼠Th1/Th