1、目的：本研究目的在于通過(guò)對(duì)臨床患者尿脫落細(xì)胞檢查、血樣及尿樣標(biāo)本Real-time PCR檢測(cè)，探討并掌握BKV的檢測(cè)方法，初步了解腎移植術(shù)后患者BKV感染的情況，患者特征，篩選導(dǎo)致其感染復(fù)發(fā)可能的危險(xiǎn)因素，對(duì)其移植腎的長(zhǎng)期存活率做出預(yù)測(cè)。
　　 方法：
　　 1，實(shí)時(shí)熒光定量PCR外參照系和標(biāo)準(zhǔn)曲線的合成：查閱文獻(xiàn)并設(shè)計(jì)反應(yīng)引物，確定反應(yīng)體系，化學(xué)合成BK病毒陽(yáng)性模板，通過(guò)PCR擴(kuò)增鑒定，DNA片段的提取和純化，重組連

2、接P載體、轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，進(jìn)行菌群的陽(yáng)性克隆鑒定，提取重組質(zhì)粒并進(jìn)行梯度稀釋，RT-PCR反應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
　　 2、選擇2005年1月-2009年2月腎移植術(shù)受者113例作為受試對(duì)象，留取外周血和尿液標(biāo)本，行尿脫落細(xì)胞檢查并分別提取血樣DNA和尿樣DNA，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，按照PCR檢測(cè)結(jié)果將試驗(yàn)對(duì)象分為BKV血尿雙陰性組、尿液?jiǎn)侮?yáng)性組、血尿雙陽(yáng)性組，明確試驗(yàn)對(duì)象的BKV感染情況，將試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、分析。
　　 結(jié)果：經(jīng)過(guò)RT-PCR反應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，證實(shí)所合成引物、探針、目的片段之間可正常互補(bǔ)結(jié)合。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后濃度梯度稀釋可得到圖像較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。PCR反應(yīng)檢測(cè)BKV靈敏度下限為2.14×102copis/ul模板濃度，引物和探針具有BKV特異性。113例腎移植術(shù)后患者經(jīng)尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查、血樣DNA和尿樣DNA RT-PCR檢測(cè)，Decoy細(xì)胞檢出率為23.9％，尿液BKV RT-PCR陽(yáng)性率約為22.12％；血

4、液RT-PCR反應(yīng)陽(yáng)性率為5.30％，。比較血尿雙陰性組、尿液?jiǎn)侮?yáng)性組、血尿雙陽(yáng)性組三個(gè)組別之間的臨床資料，得出血尿雙陰性組同其他兩組相比在移植術(shù)前血液透析時(shí)間方面較短，術(shù)后肺部感染發(fā)生率較低，均存在顯著性差異；而三組在患者年齡、性別、冷缺血時(shí)間、尸體供腎/活體供腎、DGF、是否應(yīng)用免疫誘導(dǎo)治療、免疫抑制劑維持治療方案、急性排斥反應(yīng)方面無(wú)顯著性差異。計(jì)算不同組別的30dCRR值，按照≤67％或>67％歸類并進(jìn)行等級(jí)資料秩和檢驗(yàn)，三個(gè)組兩

5、兩比較P值均大于0.05，組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們確立并掌握了BKV病毒的檢測(cè)方法，并對(duì)臨床部分腎移植術(shù)后患者進(jìn)行了檢測(cè)。從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，尿液脫落細(xì)胞檢查可作為臨床BKV感染初步篩選方法，陰性預(yù)測(cè)率較高，但陽(yáng)性預(yù)測(cè)率低，容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，不可作為BKV感染的診斷手段。尿液樣本和血液樣本RT-PCR反應(yīng)可作為診斷BKV感染的高靈敏度和特異性的手段，還可顯示患者的病毒感染復(fù)制程度。移植術(shù)后患者的一般情況、冷缺