1、目的:血管生成是指已存在的血管芽生和套疊式的微血管生長形成新血管的過程，是一個由多種細胞因子、細胞外基質(zhì)和多種細胞組分共同參與的、動態(tài)的、協(xié)調(diào)的復(fù)雜過程。新生血管生成主要涉及血管內(nèi)皮細胞或基質(zhì)細胞的增殖、遷移、分裂、分化，以及隨后的管腔化，這一過程受到很多的血管生成因子和抑制因子的精密調(diào)控。新生血管為腫瘤生長提供必需的氧氣和養(yǎng)料，是腫瘤不斷生長的“命脈”，并為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了有利的條件。因此，通過抗血管生成療法，來達到遏制腫瘤擴散轉(zhuǎn)移的行

2、為，是目前治療腫瘤的有效策略之一。
　　 褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)是褐藻的細胞間產(chǎn)物，是一種水溶性雜多糖，其主要成分為L-巖藻糖和硫酸根，除此之外，還含有半乳糖、木糖、甘露糖、糖醛酸等。研究發(fā)現(xiàn)其具有抗病毒、抗氧化、抗炎癥、抗血管生成、抗凝血、抗腫瘤等生物活性，且其生物學(xué)效應(yīng)與它的硫酸根含量密切相關(guān)。本論文旨在研究褐藻多糖硫酸酯抗新血管生成作用，并對其機制進行初步探究。通過利用不同的血管生成模型，在體外、半體內(nèi)等不同水

3、平對褐藻多糖硫酸酯的抗新血管生成作用進行了評價;采用western、PT-PCR等方法初步探討褐藻多糖硫酸酯對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF-A)表達的影響。
　　 方法:1.采用熱水浸提-乙醇沉淀法從裙帶菜孢子葉中提取得到褐藻多糖硫酸酯，并通過苯酚-硫酸法、硫酸鋇比濁法、硫酸-咔唑法、尺寸排阻色譜柱法、旋光度法測定了Fucoidan的總糖含量、硫酸根含量、糖醛酸含量、分子量和旋光度。
　　

4、 2.采用MTT的方法檢測不同濃度的褐藻多糖硫酸酯對人臍靜血管內(nèi)皮細胞的增殖抑制作用。
　　 3.利用Transwell模型評價不同濃度的褐藻多糖硫酸酯對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的遷移抑制作用。
　　 4.采用管腔形成模型評價了褐藻多糖硫酸酯對新血管生成的抑制作用。
　　 5.應(yīng)用新生血管網(wǎng)的抑制實驗評價了褐藻多糖硫酸酯在體外水平抑制新血管生成作用。
　　 6.采用大鼠動脈環(huán)模型探討了褐藻多糖硫酸酯在半體內(nèi)水

5、平抑制新血管生成作用。
　　 7.利用western、RT-PCR方法檢測經(jīng)褐藻多糖硫酸酯處理的人臍靜脈內(nèi)皮細胞中VEGF-A在蛋白水平和基因水平的表達，對其抗血管生成機制進行初步探究。
　　 結(jié)果:1.苯酚-硫酸法、硫酸鋇比濁法、硫酸-咔唑法、尺寸排阻色譜柱法結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯的總糖含量、硫酸根含量、糖醛酸含量和分子量分別為59.2％、21％、9.13％和9.52×104Da。旋光度檢測顯示褐藻多糖硫酸酯的旋光度為

6、0.99°(0.6mg/ml)。
　　 2.MTT結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的增殖有一定的抑制作用，并且與多糖的濃度及作用時間有依賴關(guān)系。作用24h抑制效果不明顯，48h的增殖抑制率明顯提高。
　　 3.Transwell模型實驗結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯能夠抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的遷移能力。
　　 4.管腔形成模型結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的管腔形成有一定的抑制作用，且隨著藥物

7、濃度的增加，其抑制作用提高，有較好的量效關(guān)系。
　　 5.新生血管網(wǎng)的抑制實驗結(jié)果表明褐藻多糖硫酸酯對已經(jīng)形成的新生血管網(wǎng)具有抑制作用，且抑制作用較為顯著。
　　 6.大鼠動脈環(huán)模型是內(nèi)皮細胞增殖、遷移、管腔形成的一個綜合結(jié)果的體現(xiàn)。實驗結(jié)果表明隨著褐藻多糖硫酸酯濃度的增加其對動脈環(huán)新生血管生成的抑制作用也隨之增加。
　　 7.Western、RT-PCR結(jié)果均顯示褐藻多糖硫酸酯作用人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞能夠下調(diào)V