1、課題依據:
　　 胃潰瘍病(GU)是一種多病因疾病,亦是消化系統(tǒng)的常見疾病,呈世界性分布,約有5％-10％的人一生中患過此病。其發(fā)病機制較為復雜,目前認為各種與發(fā)病有關的因素,如胃酸、胃蛋白酶、感染、遺傳、體質、環(huán)境、飲食、生活習慣、神經精神因素等,通過不同的途徑或機制,使胃粘膜攻擊因子和自身防御一修復因子之間失衡所致,其臨床特點為病程長,易復發(fā),且常伴一些嚴重的并發(fā)癥。
　　 目前治療消化性潰瘍的藥物主要為質子泵抑制劑

2、(PPI)和H2受體拮抗劑(H2R),因這兩種藥物的使用,使胃潰瘍的愈合率顯著提高,但由于患者依從性、耐藥性、費用、副作用等問題的持續(xù)存在,致使該病的復發(fā)率仍居高不下。因此,研究胃潰瘍的理想治療方案仍是一項急迫而重要的任務,近幾年來人們對于胃潰瘍治療藥物的開發(fā),往往從天然藥物上尋找突破口。
　　 中醫(yī)對該病有著悠久的理論研究歷史,積累了大量的臨床診治經驗,尤其是金元時期以李東垣《脾胃論》為標志而形成雛形的脾胃學說。導師勤求古訓、

3、博采眾方,創(chuàng)制出了治療胃潰瘍的經驗方——維胃方,其由茯苓、蒲公英、白及、三七組成,全方配伍攻補兼施、標本兼治,通過臨床實踐證明其對潰瘍愈合及抗復發(fā)均有較為滿意的效果。本課題以中醫(yī)理論為指導,以MPO、H+K+-ATP酶為切入點,參照Watanebet等的經典造模方法并加以改進,建立乙酸誘導大鼠胃潰瘍模型,該模型的特點在于,其肉眼觀察和組織形態(tài)學觀察均與人類的消化性潰瘍非常相似,持續(xù)時間短則8-10天,長則半年,一般60天左右可以自然愈合

4、,自然復發(fā)率約為30％,并通過觀察胃大體標本,進一步對造模處病理切片進行鏡下病理觀察,測定胃粘膜MPO、H+-K+-ATP酶活性,從而觀察并探討維胃方對大鼠實驗性胃潰瘍的治療機制。
　　 實驗方法:
　　 SPF級Wistar雄性大鼠56只,180～220g/只,隨機分為如下7組:正常組、模型組、自愈組、維胃方高劑量組、維胃方中劑量組、維胃方低劑量組、雷尼替丁組。正常組每日予正常飲食,模型組在造模3d后處死,自愈組觀察胃

5、潰瘍自愈情況,與用藥組同時處死。其余各用藥組均在造模3d后予相應藥物2ml/d灌胃,給藥7d后處死。除正常組外,余各組大鼠造模前禁食不禁水24h,予10％水合氯醛腹腔內注射麻醉后,于劍突下縱向逐層切開腹壁約2em,拉出胃體,并在胃前壁竇體交界處靠胃竇側漿膜面,用浸泡過100％乙酸的直徑5mm濾紙片壓貼60s,然后將胃體送回體內,逐層縫合腹壁,最后用75％酒精消毒手術切口。采集標本前大鼠禁食不禁水24h,具體步驟如下:①稱重,10％水合氯

6、醛腹腔內注射麻醉后備皮,固定；②取出鼠胃,置于冰面上,沿胃大彎剪開鼠胃,展平,沖洗胃內壁,觀察胃粘膜大體標本；③取部分潰瘍處腺胃組織放入10％甲醛溶液中固定12～16h(4℃),進一步石蠟包埋,制作病理切片；④在冰面上用玻片將新鮮腺胃部胃粘膜組織及粘液輕輕刮下,-80℃低溫冷凍后用萬分之一天平準確稱重,與冰生理鹽水按1:9的比例按常法制備成10％組織勻漿,10000r/min低溫離心10min,取上清液儲于-20℃冰箱中備用,分別用于測

7、定總蛋白、MPO、H+-K+-ATP酶活性。
　　 統(tǒng)計學處理:
　　 實驗數(shù)據用均數(shù)±標準差((x)±s)表示。多樣本均數(shù)比較用單因素方差(One-Way ANOVA)分析,組間均數(shù)兩兩比較,若方差齊性,用LSD法,若方差不齊,則用Dunnett's T3法,檢驗水準為α=0.05。所有數(shù)據均用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計。
　　 主要結果:
　　 1、胃粘膜大體標本觀察正常組大鼠胃粘膜光整完好,無充血

8、、水腫、糜爛等；模型組大鼠漿膜層充血水腫,表面可見少量淡咖啡色物質,胃粘膜充血、水腫、糜爛,多處可見出血點和潰瘍；自愈組大鼠漿膜層充血、水腫、粘連,胃粘膜表面充血、糜爛,潰瘍愈合不全；維胃方中劑量組大鼠胃粘膜表面光滑,輕度淤血；維胃方高、低劑量組大鼠胃粘膜存在出血點或較小潰瘍,淤血較為明顯；雷尼替丁組大鼠胃粘膜表面輕度淤血,未見潰瘍,偶見充血或糜爛點。
　　 2、病理切片鏡下觀察正常組大鼠胃粘膜層光整完好,腺體排列整齊,未見炎細

9、胞浸潤及粘膜下出血傾向；模型組粘膜層變薄,部分潰瘍深及肌層,粘膜下層毛細血管內可見明顯的血流瘀滯,大量炎性細胞浸潤,平滑肌細胞排列紊亂或出現(xiàn)斷裂；自愈組大鼠胃粘膜缺損達腺細胞層或粘膜下層,腺細胞排列紊亂,粘膜下層毛細血管內可見明顯血流瘀滯,有炎細胞浸潤,肌細胞部分斷裂；維胃方中劑量組大鼠胃粘膜偶見斷裂,上皮細胞腫脹,腺體間隙擴大,但粘膜下層微循環(huán)無明顯病理改變；維胃方高、低劑量組部分潰瘍缺損達粘膜下層,腺細胞密度不勻,粘膜下層炎細胞浸潤

10、；雷尼替丁組偶見缺損達腺細胞層,腺體結構良好,肌層細胞排列紊亂,未見明顯潰瘍病變。
　　 3、MPO活性變化方差齊,F=77.085,P=0.000,差異有顯著性意義,可認為各組胃粘膜MPO活性存在差別,造模后模型組大鼠胃粘膜MPO活性與正常組相比顯著升高(P=0.000),自愈組與模型組相比無顯著差異(P=0.409)。經維胃方及雷尼替丁治療的組別,胃粘膜MPO活性均較自愈組顯著降低(維胃方高中低劑量各組、雷尼替丁組與自愈組相

11、比,P值分別為:0.000、0.000、0.048、0.001),其中以維胃方中劑量組降低最為顯著(平均值為:1.739±0.268),但維胃方高、中劑量不呈劑量依賴關系,中劑量組反而低于高劑量組。雷尼替丁組與維胃方高、低劑量組比較無顯著性差異(P值分別為0.111、0.125),與中劑量組比較則有顯著性差異(P=0.000),且高于中劑量組。
　　 4、H+-K+-ATP酶活性變化方差齊,F=22.891,P=0.000,差異

12、有顯著性意義,可認為各組胃粘膜H+-K+-ATP酶活性存在差別,模型組的H+-K+-ATP酶活性顯著低于正常組及自愈組(P值分別為0.000、0.000),而經藥物治療后,各治療組H+-K+-ATP酶活性均接近正常組(維胃方高中低劑量各組、雷尼替丁組與正常組相比,P值分別為:0.081、0.053、0.316、0.136),且高于自愈組(維胃方高中低劑量各組、雷尼替丁組與自愈組相比,P值分別為:0.025、0.040、0.000、0.0

13、13)。
　　 結論:
　　 1、動物實驗是研究疾病發(fā)生機理和尋找藥物作用機制的重要手段,乙酸造模法是直接以乙酸燒灼胃漿膜面形成潰瘍,其表現(xiàn)和潰瘍愈合速度與人類消化性潰瘍極為相似,適合用于藥物療效的觀察研究,且造模穩(wěn)定性高,方法簡單,可操作性強,是目前普遍認可與使用的方法。
　　 2、根據胃大體標本的觀察情況,造模成功率高達100％,自愈組大鼠胃潰瘍的自愈效果差,用藥組起到一定治療作用,并以維胃方中劑量組的療效為

14、最佳。用藥各組潰瘍愈合情況與自愈組相比有明顯區(qū)別,尤其是維胃方中劑量組及雷尼替丁組,愈合效果均優(yōu)于其他組別。
　　 3、從鏡下病理切片觀察情況來看,維胃方中劑量組更接近正常組,腺體形態(tài)基本完好,炎性細胞少,粘膜下微循環(huán)未見明顯病理狀態(tài),恢復情況較好,證明其治療胃潰瘍的部分機制是通過改善微循環(huán)、抗炎和細胞再生。模型組胃粘膜破壞較嚴重,缺損偶及肌層,造模處腺體完全破壞,非造模處炎性細胞浸潤嚴重,腺體變形,粘膜下微循環(huán)病理改變明顯。<

15、br>　　 4、在對維胃方各組的治療效果觀察中,其表現(xiàn)出了復雜的量效關系,說明在藥材、煎煮等均相同的條件下,中藥的劑量對療效影響極為重要。
　　 5、對大鼠胃粘膜MPO活性的測定結果反映出:維胃方對胃潰瘍的治療效果是明顯的,數(shù)據中各治療組活性均較自愈組及模型組低(維胃方高中低劑量各組、雷尼替丁組與模型組比較,P值分別為:0.000、0.000、0.006、0.000,與自愈組比較,P值分別為:0.000、0.000、0.048

16、、0.001),維胃方高、低劑量組活性與雷尼替丁組相比無統(tǒng)計學意義(P值分別為0.111、0.125),但中劑量組活性低于雷尼替丁組(P=0.000),表明其抗炎作用優(yōu)于雷尼替丁。
　　 6、從H+-K+-ATP酶活性變化的數(shù)據統(tǒng)計結果可以看出:潰瘍程度越嚴重,胃泌酸功能越差,其活性越低(模型組與正常組比較P=0.000),而經維胃方治療后,各組的活性均接近正常組(維胃方高、中、低劑量組與正常組比較,P值分別為:0.081、0.

17、053、0.316),與雷尼替丁組的值亦很接近,說明維胃方有明顯修復胃粘膜潰瘍的作用,其可能機理并非在于抑制基礎胃酸分泌,相反,它能修復受損的胃粘膜,使其泌酸功能恢復正常,其效果與臨床常用胃潰瘍治療藥物雷尼替丁相似,這也符合大體標本的觀察結果。
　　 綜上所述,本研究的實驗造模是成功的,通過對大鼠胃潰瘍大體愈合情況及潰瘍處粘膜病理組織切片光學顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)維胃方能通過改善微循環(huán)、抗炎和細胞再生有效治療胃潰瘍,并以其臨床標準劑