1、目的:消化性潰瘍是目前發(fā)病率比較高的一種疾病。胃潰瘍發(fā)生后胃黏膜的修復(fù)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。三葉因子家族是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的具有黏膜保護(hù)與修復(fù)、腫瘤抑制、信號(hào)傳導(dǎo)等功能的一類(lèi)小分子多肽,包括TFF1、TFF2和TFF3。TFF2在胃潰瘍黏膜修復(fù)過(guò)程中具有促進(jìn)細(xì)胞遷移,增強(qiáng)黏液粘性,減少H+滲透的作用。TFF2主要在胃腸道黏膜表達(dá),但在人體其它器官也有表達(dá)。胰腺也是TFF2的重要表達(dá)部位。本論文通過(guò)對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍形成和修復(fù)過(guò)程中胰腺TFF2基因

2、和蛋白表達(dá)變化的研究,血清TFF2含量的檢測(cè),探討在胃潰瘍形成和愈合過(guò)程中TFF2的可能調(diào)節(jié)機(jī)制,為胰腺TFF2在胃潰瘍自愈過(guò)程中的作用提供依據(jù)。
　　 方法:清潔級(jí)SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為潰瘍組(n=42)、鹽水對(duì)照組(n=42)和正常組(n=6)。潰瘍組在胃前壁近胃竇處黏膜下注射冰乙酸0.01ml,制備大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型。正常組不做處理。鹽水組模擬潰瘍組手術(shù),注射等量生理鹽水代替冰乙酸。造模后第1、2、4、6、10、14

3、、23d,對(duì)潰瘍組和鹽水組分批解剖,取胰腺組織,每次6只。正常組于造模后1天進(jìn)行取材。分別測(cè)量各組潰瘍部位的體積,用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TFF2在胰腺的定位表達(dá)及潰瘍組和鹽水組TFF2表達(dá)的變化,于每張切片上隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400),使用Motic6.0軟件并對(duì)圖像進(jìn)行半定量分析,分別獲得各實(shí)驗(yàn)組大鼠胰腺組織TFF2陽(yáng)性目標(biāo)平均灰度。以SPSS18.0對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA方差分析及q檢驗(yàn);RT-PCR檢測(cè)各組胰腺TFF2 mR

4、NA的轉(zhuǎn)錄情況,PCR反應(yīng)產(chǎn)物于1.5％瓊脂糖中電泳,用UVP GELDOC-IT凝膠成像系統(tǒng)觀察并攝片,分別檢測(cè)TFF2和GAPDH條帶的吸光度,根據(jù)TFF2 mRNA與GAPDH基因條帶的光密度比值對(duì)TFF2 mRNA表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析;用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清中TFF2含量的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.成功獲得大鼠胃潰瘍模型,造模穩(wěn)定,成功率高。術(shù)后1d,大鼠胃前壁形成一直徑約4～6mm的圓形或橢圓形潰瘍

5、面,和外周界限清晰,外周黏膜充血伴有水腫;潰瘍術(shù)后第4d形成龕形潰瘍,部分肝臟及周?chē)缶W(wǎng)膜粘連并包裹底部,很難分離;術(shù)后1～6天潰瘍體積較大,之后潰瘍修復(fù),潰瘍體積減小,第23天潰瘍局部接近愈合。
　　 2.免疫組織化學(xué)染色及圖像分析結(jié)果:
　　 胰腺TFF2陽(yáng)性信號(hào)主要分布在胰島,個(gè)別導(dǎo)管上皮也見(jiàn)TFF2表達(dá)。胃潰瘍術(shù)后早期(1、2、4、6d)胰腺胰島TFF2增多較為明顯。潰瘍術(shù)后6d,胰島平均灰度值最低(87.98±

6、3.93)(P＜0.01),TTF2陽(yáng)性信號(hào)最強(qiáng),隨后表達(dá)下降,但仍高于相應(yīng)鹽水組及正常組(P＜0.05或P＜0.01)。鹽水組胰島TFF2表達(dá)除第1天比正常組增強(qiáng)外(P＜0.01),其余各天均和正常組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。潰瘍組2d～23d胰島TFF2表達(dá)均強(qiáng)于相應(yīng)鹽水組(P＜0.01),1d的潰瘍組和鹽水組TFF2表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。3潰瘍組手術(shù)后1d開(kāi)始,血清中TFF2的含量就開(kāi)始顯著增加,到第2天時(shí)含量達(dá)到

7、最高值(338.62±58.72pmol/L)(P＜0.01),2～6d一直維持一個(gè)較高水平,之后開(kāi)始下降,但直至23d仍高于正常組和鹽水組((P＜0.05或P＜0.01)。鹽水組第1、2、4d中,血清TFF2含量維持較高水平(P＜0.05或P＜0.01),到第6、10、14、23開(kāi)始下降,與正常組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。4 RT-PCR法檢測(cè)TFF2 mRNA的轉(zhuǎn)錄情況
　　 TFF2 mRNA在正常組呈低水平表達(dá);潰瘍