1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文黃鱔促性腺激素釋放激素(GnRH)cDNA分子部分序列的研究姓名：張春霖申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：魯成;李英文20000601瓊脂糖凝膠電泳分離并回收純化的P C R 片段。，轉(zhuǎn)化進(jìn)入T S S 致敏的大腸桿菌X L —B I u e 菌株中。a ．互補(bǔ)篩選重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的細(xì)菌，從中挑取了3 6 個(gè)白色菌落進(jìn)行一步法檢測(cè)，其中有兩個(gè)表現(xiàn)出滯后。滯后菌落經(jīng)H i n d l I I 和E

2、e o RI 雙酶切，均得到一條同樣大小的片段。而蘭色菌落的質(zhì)粒經(jīng)雙酶切卻無此帶。從酶切結(jié)果看出，目的片段已經(jīng)克隆進(jìn)入質(zhì)粒載體中，并已在一些茵落中得到擴(kuò)增。4 克隆片段的序列測(cè)定及分析分離并用P E G ( M W = 8 0 0 0 ) 純化的質(zhì)粒在大連寶生物工程公司進(jìn)行序列測(cè)定。得到所克隆的片段為2 2 6 b p ，所測(cè)得的序列與虹鱒G n R H ，馬蘇大麻哈魚G n R H ，海鱸G n R H l ，2 ，金魚G n R H

3、 及蘭背鯛G n R H 的c D N A 進(jìn)行比較分別有4 7 ．9 5 ％，5 2 ．2 ‰4 5 ．7 ％，5 0 ．4 1 ％，5 0 ．9 6 ％和5 0 ％的相似性。顯示了編碼G n R I - I 的基因在不同種類間的獨(dú)立性。5 克隆片段的氨基酸釋讀及分析對(duì)所克隆片段的核苷酸序列進(jìn)行氨基酸釋讀，并與其它硬骨魚類G n R H 前體的氨基酸序列進(jìn)行比較分析。發(fā)現(xiàn)該片段編碼黃鱔c G n R H ．I I 前體的羧基端的5 1

4、 個(gè)氨基酸，其中包括：G n R I - I 十肽中5 ～1 0 位氨基酸、三肽i J n q - 位點(diǎn)和相關(guān)肽序列( 4 2 個(gè)氨基酸殘基) 。這一多肽片段的氨基酸順序?yàn)? 下畫線部分為三肽加工位點(diǎn)) ：H G W Y P G 壘基塞E G N V V I L I N A P V E I I 可D K W I Q w K K R N K M Y F CN V V C V I T V V T C這一多肽鏈與其它硬骨魚類的G n R H