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文檔簡介
1、雪松是松科Pianaceae植物雪松屬Cedrus Trew樹種的泛稱,其針葉為13個可供藥用的松針之一[1],雪松松針主要化學成分有木脂素類、黃酮類、有機酸類、多糖類及針葉膠等,具有抗腫瘤、抗氧化、抗病毒及蚊蟲毒殺等多種功效。為了開發(fā)利用雪松松針,本文對雪松松針總木脂素的提取純化工藝和體外抗腫瘤作用進行了系統的研究。
本研究主要內容包括:⑴雪松松針總木脂素的含量測定及提取工藝研究:采用磷鉬酸顯色分光光度法,以厚樸酚為對照品,
2、在最大吸收波長740nm處測定雪松松針總木脂素含量,在單因素試驗基礎上,以乙醇濃度、料液比、提取時間為響應因子,雪松松針總木脂素含量為響應值,根據Box-Behnken中心組合設計進行了三因素三水平的試驗及響應面分析。優(yōu)化得到的雪松松針總木脂素的提取工藝為:乙醇濃度為77.96%、液料比為25:1,提取時間為1.78 h,在最佳工藝條件,雪松松針總木脂素含量達到99.2mg/g,與理論預測值100.49 mg/g相近。⑵大孔吸附樹脂純化
3、雪松松針總木脂素的工藝研究:以雪松松針總木脂素的吸附率與解吸附率為指標,通過對S-8、D101、AB-8、X-5、NKA-9及HPD-100樹脂的吸附-解吸附能力考察,從中篩選出了適合純化雪松松針總木脂素的大孔樹脂,并確定純化工藝參數。結果表明,AB-8樹脂為純化雪松松針總木脂素的優(yōu)良材料;最佳純化工藝為:上樣量為6 BV,濃度為2.18 mg/mL,以1.5mL/min的流速進行動態(tài)吸附;吸附飽和后,用蒸餾水以1.5 mL/min沖洗
4、5 BV除去水溶性雜質及未吸附于柱上的殘液;最后用4BV的80%乙醇以1 mL/min的流速進行解吸,收集解析液經濃縮、干燥得到平均含量為57.77%的雪松松針總木脂素提取物。⑶雪松松針總木脂素及蛇床子素的抗腫瘤活性評價:選用人宮頸癌 HeLa細胞株、人胃癌細胞株 MKN45、人肺癌細胞株 A549、人肝癌細胞株 HepG2及人結腸癌細胞HT-29,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法進行體外細胞增殖抑制試驗,篩選
5、雪松松針總木脂素及其從中分離得到的木脂素單體蛇床子素的敏感瘤株。結果表明,雪松松針總木脂素和蛇床子素對5種腫瘤細胞的增殖均有較強的抑制作用,雪松松針總木脂素的抑制作用從強到弱依次為 A549>HeLa>HepG2>HT-29>MKN45;蛇床子素的抑制作用從強到弱依次為 A549>HepG2>HT-29>MKN45>HeLa,其中雪松松針總木脂素和蛇床子素對人肺癌細胞株A549作用最強,IC50分別為39.82μ g/mL和35.68μ
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