1、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體是一類分布于細(xì)胞膜上介導(dǎo)內(nèi)外源性物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白質(zhì)。作為體內(nèi)重要的內(nèi)外源性物質(zhì)消除器官，肝臟分布著多種藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體，如OATP1B1、OATP1B3、OATP2B1、OAT2、OAT7、OCT1、NTCP等攝入型藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體與MRP3、MRP4、MRP6、BCRP（ABCG2）、BSEP（ABCB11）、MRP2（ABCC2）、P-GP、MATE1等外排型藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體。肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的生理功能是將大多數(shù)內(nèi)源性物質(zhì)、外源性藥物等攝

2、取入肝細(xì)胞,再經(jīng)肝細(xì)胞的藥物代謝酶的生物轉(zhuǎn)化，最終將其經(jīng)膽汁排至體外，因此肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)體對(duì)肝細(xì)胞在攝取、代謝與排泄內(nèi)外源性物質(zhì)的功能方面發(fā)揮著重要作用。肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)與功能異常導(dǎo)致血漿藥物濃度改變，從而引起其藥效學(xué)效應(yīng)變化，可能產(chǎn)生治療無(wú)效，甚至藥物蓄積導(dǎo)致毒副作用。
　　肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)與活性常受藥物、疾病等多種因素的影響。糖尿病、肥胖等眾多疾病都可影響肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)與活性。而目前關(guān)于高膽固醇血癥影響肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的

3、表達(dá)與活性的報(bào)道較少。故本研究擬考察高膽固醇血癥影響肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)規(guī)律及可能的調(diào)控機(jī)制，從而揭示高膽固醇血癥通過(guò)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生疾病-藥物間相互作用的可能性，為高膽固醇血癥患者的合理臨床用藥提供重要參考。
　　第一章:高膽固醇血癥血清代謝變化的代謝組學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　主要采用代謝組學(xué)技術(shù)分析高膽固醇血癥血清代謝變化，分析受高膽固醇血癥影響的代謝通路，初步考察引起血清代謝物變化的可能藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體。
　　

4、實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.采用飼喂大鼠高膽固醇飲食造成高膽固醇血癥模型。
　　2.常規(guī)生化分析技術(shù)檢測(cè)高膽固醇血癥血清生化指標(biāo)變化。
　　3.非靶向LC-MS/MS的代謝組學(xué)技術(shù)分析高膽固醇血癥血清代謝成分變化。
　　4.多元統(tǒng)計(jì)分析研究高膽固醇血癥的代謝組特征，并篩選出高膽固醇血癥密切相關(guān)的標(biāo)志性代謝物。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.大鼠經(jīng)8周高膽固醇飼料喂養(yǎng)后，高膽固醇血癥組大鼠血清總膽固醇(TC)、低密度

5、脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C明顯高于對(duì)照組（P<0.05），但甘油三酯(TG)與對(duì)照組無(wú)差異，表明高膽固醇血癥模型已成功構(gòu)建。
　　2.與對(duì)照組相比，高膽固醇血癥組總膽酸、總膽紅素、直接膽紅素、肌酐、尿素、尿酸都明顯升高（P<0.05），但血糖、AST、ALT并未升高。生化分析結(jié)果初步提示高膽固醇血癥存在代謝紊亂。
　　3.代謝組學(xué)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析揭示

6、出高膽固醇血癥血清中多種差異代謝物升高，如肌酸、肌酐、甘氨膽酸、多種氨基酸如甲硫氨酸等，提示高膽固醇血癥存在氨基酸、膽酸與肌酸代謝紊亂。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　高膽固醇血癥存在明顯代謝紊亂，如膽紅素、膽酸、肌酸與氨基酸代謝紊亂。直接膽紅素、膽酸等代謝分子的升高提示肝臟中相應(yīng)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)與功能可能受到抑制。
　　第二章:高膽固醇血癥影響肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的蛋白組學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　探討高膽固醇血癥影響

7、肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)規(guī)律及可能的調(diào)控機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.iTRAQ標(biāo)記結(jié)合LC-MS/MS的蛋白（質(zhì)）組學(xué)技術(shù)分析受高膽固醇血癥影響的肝臟差異表達(dá)蛋白。
　　2.生物信息學(xué)技術(shù)，如GO分析、通路分析與上游調(diào)控分子分析，篩選受到高膽固醇血癥調(diào)控的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體及其信號(hào)機(jī)制。
　　3.RT-qPCR與western blot方法分別從mRNA和蛋白水平確證候選藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)趨勢(shì)的可靠性。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

8、
　　1.蛋白組學(xué)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，高膽固醇血癥組差異表達(dá)蛋白共有239個(gè)，其中上調(diào)表達(dá)188個(gè)，下調(diào)表達(dá)51個(gè)（P<0.05，表達(dá)變化大于2倍，至少2條可信肽段）。
　　2.GO分析表明差異表達(dá)蛋白發(fā)揮結(jié)合功能，催化活性與轉(zhuǎn)運(yùn)功能等。參與轉(zhuǎn)運(yùn)功能的差異表達(dá)蛋白中鑒定出MRP2、OAT2等多種藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體。與對(duì)照組相比，高膽固醇血癥大鼠肝臟的MRP2與OAT2表達(dá)下降。
　　3.通路分析與上游調(diào)控分子分析表明OAT

9、2與MRP2既受到多種核受體調(diào)控，亦受到炎癥因子調(diào)控。
　　4.RT-qPCR與western blot方法表明高膽固醇血癥大鼠肝臟MRP2與OAT2的表達(dá)下調(diào)，證實(shí)蛋白組學(xué)鑒定結(jié)果的可靠性。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　iTRAQ標(biāo)記結(jié)合LC-MS/MS的蛋白組學(xué)、生物信息學(xué)、RT-qPCR與western blot等技術(shù)鑒定出高膽固醇血癥下調(diào)肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2與OAT2的表達(dá)。其次，藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2與OAT2的表達(dá)受

10、到核受體與炎癥因子調(diào)控，提示炎癥性疾病高膽固醇血癥可能通過(guò)炎癥因子抑制核受體功能繼而下調(diào)肝臟表達(dá)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2與OAT2。
　　第三章:高膽固醇血癥下調(diào)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2與OAT2表達(dá)的機(jī)制研究
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　探索高膽固醇血癥調(diào)控MRP2與OAT2表達(dá)的分子機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.RT-qPCR與western blot方法分析高膽固醇血癥影響的肝臟核受體變化趨勢(shì)。
　　2.West

11、ern blot方法考察LXRα激動(dòng)劑對(duì)高膽固醇血清或炎癥因子TNF-α所下調(diào)MRP2與OAT2的表達(dá)影響。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)分析 LXRα激動(dòng)劑對(duì)高膽固醇血清或炎癥因子TNF-α所下調(diào)MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)活性的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.與對(duì)照組相比，高膽固醇血癥組肝臟LXRαmRNA表達(dá)明顯下降（P<0.05），CAR mRNA表達(dá)則明顯上升（P<0.05），其他核受體FXR、PXR、PPARγ mRNA表達(dá)無(wú)明顯變

12、化；LXRα蛋白表達(dá)也呈同樣趨勢(shì)（P<0.05）。結(jié)果提示 LXRα與 CAR可能參與高膽固醇血癥下調(diào)肝臟表達(dá)MRP2與OAT2。
　　2.與正常血清相比，高膽固醇血清下調(diào)HepG2細(xì)胞的 MRP2與OAT2表達(dá)（P<0.05），但LXRα激動(dòng)劑T0901317能回復(fù)高膽固醇血清所下調(diào)MRP2與OAT2表達(dá)（P<0.05）。同樣，與對(duì)照組相比，TNF-α下調(diào)HepG2細(xì)胞的MRP2與OAT2表達(dá)（P<0.05），但LXRα激動(dòng)劑T

13、0901317能回復(fù)TNF-α所下調(diào)MRP2與OAT2表達(dá)（P<0.05）。結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)高膽固醇血癥通過(guò)下調(diào)LXRα功能來(lái)抑制肝細(xì)胞表達(dá)MRP2與OAT2。
　　3.與正常血清相比，高膽固醇血清下調(diào)HepG2細(xì)胞的MRP2外排底物CDCFDA（P<0.05）；但LXRα激動(dòng)劑T0901317能回復(fù)MRP2外排活性（P<0.05）。同樣，與對(duì)照組相比，TNF-α下調(diào)HepG2細(xì)胞的MRP2外排底物CDCFDA（P<0.05）；但L

14、XRα激動(dòng)劑T0901317能回復(fù)TNF-α所下調(diào)MRP2外排活性（P<0.05）。結(jié)果證實(shí)高膽固醇血癥通過(guò)下調(diào)LXRα功能來(lái)抑制肝細(xì)胞MRP2的轉(zhuǎn)運(yùn)活性。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　高膽固醇血癥通過(guò)抑制核受體LXRα信號(hào)通路來(lái)下調(diào)肝臟的MRP2與OAT2的表達(dá)與活性。升高的炎癥因子TNF-α至少部分介導(dǎo)高膽固醇血癥的上述作用。
　　第四章:高膽固醇血癥下調(diào)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2與OAT2活性的臨床意義分析
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

15、
　　考察高膽固醇血癥患者是否存在MRP2與OAT2的活性降低現(xiàn)象。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.比較高膽固醇血癥人群與正常對(duì)照人群的 MRP2底物直接膽紅
　　素與OAT2底物尿酸與肌酐的血清濃度。
　　2.分析血脂水平與MRP2及OAT2底物血清水平的相關(guān)性。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.與正常對(duì)照組相比，高膽固醇血癥組患者的BMI、收縮壓、舒張壓、TC、LDL-C、HDL-C、TG、AST、ALT

16、、總膽紅素、間接膽紅素、尿素都明顯升高（P<0.05）。而兩組間年齡、性別、血糖、總蛋白、球蛋白、白蛋白則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.與正常對(duì)照組相比，高膽固醇血癥組患者的直接膽紅素明顯升高（P<0.05），提示肝臟MRP2活性降低。同樣，高膽固醇血癥組患者的尿酸與肌酐明顯升高（P<0.05），提示OAT2活性降低。
　　3.相關(guān)性分析表明TC及LDL-C與直接膽紅素、尿酸、肌酐等都成正相關(guān)，且具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。TG