1、黃葵又名黃蜀葵花(Abelmoschusmanihot(L.)Medic)是錦葵科秋葵屬中草藥,該藥具有抗炎、抑菌、抗凝血、抗氧化、利尿、對心肌和腦缺血損傷的保護作用,對腎細胞膜的保護作用等,在臨床上常被用來治療慢性腎炎、糖尿病腎病、口腔潰瘍和燒傷等疾病。現有對黃葵化學成分和藥理作用的研究,表明其中主要的化學成分是金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、棉皮素、槲皮素、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷等為主的黃酮類成分。第Ⅲ

2、類新藥黃葵膠囊,不久前已獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)的審批,主要是由黃蜀葵花的醇提取物組成,廣泛用于治療慢性腎小球腎炎。截至目前,黃葵膠囊已成為我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥在治療慢性腎炎方面發(fā)揮重要作用的常用中藥。
　　 隨著黃葵在臨床上的廣泛應用,對其體內動態(tài)過程的解析顯的相當重要,為此,本論文通過建立大鼠在體腸灌流模型、腸道菌群體外代謝模型;采用微透析采樣技術與UPLC-O-TOF-MS聯(lián)用分析技術、運用UPLC-Q-TOF-M

3、S中MSEE數據采集方式,以質量丟失濾過(MDF)處理為基礎快速篩選和鑒定代謝物的方法,試圖從中獲取大量的生物信息,以明確其在體內吸收和代謝過程的特征,闡明黃葵黃酮類成分的作用機制與過程。對于指導新藥設計,提高藥物療效和安全性,科學的評價黃葵黃酮類成分的藥用價值奠定了基礎。
　　 首先,本論文綜述了黃葵化學成分、相關藥理學研究、常規(guī)的吸收模型、黃酮類成分的吸收代謝研究、微透析采樣技術,為黃葵黃酮類成分的吸收和代謝過程的研究奠定了

4、基礎。
　　 為了研究黃葵黃酮類成分的腸吸收機制,進行了黃葵醇提物不同濃度、不同腸段大鼠在體腸吸收的研究。采用HPLC法測定循環(huán)液中藥物濃度,分析了黃葵6種黃酮類成分的腸吸收,開展了P-gp抑制劑、吸收促進劑對黃葵黃酮類成分吸收影響的研究。實驗結果顯示:黃葵各黃酮成分在不同濃度下,Ka值沒有明顯差異(P＞0.05),吸收呈一級動力學過程,提示為被動擴散吸收;各黃酮成分之問的吸收有差異性,苷類成分的Ka值小于苷元類成分;各成分在不

5、同腸段均有吸收,金絲桃苷和楊梅素的最佳吸收部位分別為空腸和十二指腸;P-gp抑制劑維拉帕米可促進異槲皮苷、金絲桃苷、楊梅素和槲皮素3'-O-葡萄糖苷的吸收。吸收促進劑牛膽鹽可顯著增加異槲皮苷、棉皮素-8-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3'-葡萄糖苷、楊梅素和金絲桃苷的吸收,SDS可顯著增加異槲皮苷、棉皮素-8-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3'-葡萄糖苷和金絲桃苷的吸收,卵磷脂、EDTA對黃葵各黃酮成分無顯著的促吸收效果(P＞0.05)。有些吸收促進劑

6、如卵磷脂、EDTA,甚至減少各組分的吸收。上述吸收促進劑對槲皮素均無顯著差異,提示槲皮素的吸收可能與上述幾種促進吸收劑所介導的吸收機制無關。
　　 建立了腸道厭氧菌群體外代謝研究模型,對黃葵黃酮類成分的腸道菌群代謝進行了研究。實驗結果顯示:在人腸道菌孵育液中發(fā)現以下成分:金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素、金絲桃苷羥基化產物、2個金絲桃苷乙?；a物、槲皮素雙羥基化產物、槲皮素甲基化結合產物、

7、槲皮素脫氧、楊梅素的乙酰化產物。在大鼠腸道菌孵育液中發(fā)現以下成分:金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素-3'-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、2個金絲桃苷羥基化產物、2個金絲桃苷乙?；a物、槲皮素甲基化結合產物、槲皮素脫氧、楊梅素的乙?；a物。另外經研究表明主要的黃酮苷類成分均水解為相應的苷元,揭示黃葵黃酮類成分在腸道菌群中的代謝途徑主要是以水解反應和羥基化等Ⅰ相代謝反應為主。
　　 通過灌胃給

8、藥,首先考察了黃葵黃酮類成分在大鼠體內的分布情況,試圖尋找黃葵黃酮類成分在體內的靶向器官。實驗結果表明:黃葵黃酮類各組分在大鼠體內的分布主要集中在腎、肝中,這與黃葵廣泛的應用于腎病的治療是相符的。通過微透析取樣技術與UPLC-Q-TOF/MS聯(lián)用分析黃葵黃酮類成分在大鼠血液和靶向器官腎臟中的代謝情況,試圖尋找其存在的潛在活性成分。實驗結果表明,在大鼠血液透析液中發(fā)現了:金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲

9、皮素-3'-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、槲皮素單葡萄糖醛酸苷-1和槲皮素單葡萄糖醛酸苷-2。在大鼠腎透析液中發(fā)現了:金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素單葡萄糖醛酸苷-2。
　　 研究表明黃蜀葵的醇提取物能夠保護小鼠避免受戊四唑引起的驚厥反應并降低小鼠的死亡率;可減少小鼠游泳時不動時間,此外,通過超高效液相質譜聯(lián)用技術(UPLC-MS)測定大鼠腦內黃蜀葵醇提物的潛在活性成分,結果表明其潛在活性成分主要是異槲皮苷,金絲桃苷,槲皮素-3'-

10、O葡萄糖苷,槲皮素及三種代謝物,這些成分可能是黃蜀葵醇提物中的活性成分,并具有潛在的抗驚厥及抗抑郁作用。
　　 采用UPLC-Q-TOF-MS聯(lián)用技術,通過MetabolynxTM軟件中的MSE數據采集方式,以質量丟失濾過(MDF)處理為基礎,研究了大鼠靜脈注射金絲桃苷后金絲桃苷在血漿、尿液、膽汁中的代謝,金絲桃苷總共被檢測到原型及其12個Ⅱ相代謝產物,結果表明甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化是金絲桃苷在體內的主要代謝途徑。在血漿中

11、發(fā)現了:金絲桃苷的原型、3'-O-甲基-金絲桃苷;在尿液中發(fā)現了:金絲桃苷的原型、3'-O-甲基-金絲桃苷、4'-O-甲基-金絲桃苷、2個金絲桃苷的硫酸化結合產物、金絲桃苷的甲基化葡糖醛酸代謝物、金絲桃苷的硫酸化葡糖醛酸結合產物、2個金絲桃苷的甲基化硫酸結合產物。在膽汁中發(fā)現了:3'-O-甲基-金絲桃苷、4'-O-甲基-金絲桃苷、金絲桃苷的硫酸化結合產物、3個金絲桃苷的甲基化葡糖醛酸代謝物、2個金絲桃苷的甲基化硫酸結合產物、2個金絲桃苷