1、目的:睡眠是人和哺乳動(dòng)物基本的生理需求，隨著生活節(jié)奏加快及社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)加劇，睡眠剝奪（Sleep deprivation，SD）成為一個(gè)常見且日益嚴(yán)重的問(wèn)題。睡眠剝奪是指由于各種原因?qū)е碌乃卟蛔慊騺G失狀態(tài)。睡眠剝奪可引起情緒、學(xué)習(xí)記憶等活動(dòng)的改變，并且對(duì)機(jī)體多系統(tǒng)、多臟器的功能產(chǎn)生損害，如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)等。哺乳動(dòng)物腦內(nèi)的睡眠中樞與覺醒中樞分別由眾多的神經(jīng)核團(tuán)及神經(jīng)遞質(zhì)組成，其中

2、海馬及下丘腦參與睡眠-覺醒周期的調(diào)節(jié)。睡眠剝奪后引起的自身平衡狀態(tài)的紊亂與腦內(nèi)某些結(jié)構(gòu)有關(guān)。蛋白質(zhì)組學(xué)是指一種細(xì)胞或者一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)，其本質(zhì)是在大規(guī)模的水平上研究蛋白質(zhì)的特性，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)、翻譯、修飾及蛋白質(zhì)間的相互作用，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的整體認(rèn)識(shí)。我們可運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)鑒定不同條件下蛋白質(zhì)組中的差異成分，從而揭示一定的生物學(xué)現(xiàn)象和規(guī)律。通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)研究，我們可以對(duì)疾病或病理狀態(tài)的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中蛋白質(zhì)的調(diào)控

3、網(wǎng)絡(luò)有一個(gè)完整清晰的認(rèn)識(shí)，有助于進(jìn)一步理解疾病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。既往研究證明，睡眠剝奪與神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病關(guān)系密切，但其病理生理機(jī)制尚未完全清楚，所以在整體蛋白表達(dá)的水平上了解睡眠剝導(dǎo)致的蛋白表達(dá)差異對(duì)我們了解其病理生理機(jī)制將大有裨益。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)對(duì)照組、睡眠剝奪組及睡眠剝奪+維生素C組大鼠海馬組織進(jìn)行研究，分離、鑒定差異蛋白，以期深入了解睡眠剝奪與神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病發(fā)生的相關(guān)機(jī)制，并為治療提供新的方向。
　　方法:1

4、、成年雄性Wistar大鼠分為實(shí)驗(yàn)組、睡眠剝奪組、睡眠剝奪+VC組，睡眠剝奪組及睡眠剝奪+VC組大鼠進(jìn)行72小時(shí)睡眠剝奪，對(duì)照組大鼠維持正常睡眠-覺醒周期，維持室溫22℃，光照08:00-20:00;2、大鼠睡眠剝奪完成后，各組動(dòng)物在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死，快速斷頭取腦，在冰盤上分離出海馬，留取海馬組織置于-80℃冰箱中備用;3、進(jìn)行大鼠海馬組織蛋白質(zhì)提取、酶解，脫鹽后待用;4將制備好的樣品肽段TMT標(biāo)記，上樣buffer溶解，膠條水化，并經(jīng)T

5、FA酸化后進(jìn)行C18 Zip-Tip脫鹽;5抽干后樣品溶解，離心，并用LC-LTQ-MS/MS分析以及質(zhì)譜數(shù)據(jù)檢索;6應(yīng)用GeneCodis3對(duì)所得差異蛋白進(jìn)行生物功能分析。
　　結(jié)果:1、運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)得出:睡眠剝奪組與對(duì)照組比較，得出差異蛋白99個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)的蛋白有65個(gè)，表達(dá)下調(diào)的蛋白有34個(gè);睡眠剝奪+VC組與睡眠剝奪組比較，得出差異蛋白20個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)的蛋白有10個(gè)，表達(dá)下調(diào)的蛋白有10個(gè)。
　　2、G

6、eneCodis3分析得出差異蛋白的生物學(xué)過(guò)程，睡眠剝奪組大鼠海馬組織差異蛋白的功能主要涉及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、細(xì)胞凋亡過(guò)程、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白質(zhì)水解、氧化應(yīng)激反應(yīng)、低氧反應(yīng)、長(zhǎng)時(shí)記憶、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)泛素化等方面。
　　3、睡眠剝奪+維生素C組與睡眠剝奪組大鼠海馬組織差異蛋白主要涉及脂質(zhì)代謝過(guò)程、過(guò)氧化氫代謝過(guò)程、細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白質(zhì)泛素化等方面。
　　結(jié)論:1、運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)我們鑒定出睡眠剝奪大鼠海馬組織中差異表達(dá)蛋

7、白，初步建立睡眠剝奪大鼠海馬組織蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)，這些差異蛋白主要涉及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、細(xì)胞凋亡過(guò)程、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白質(zhì)水解、氧化應(yīng)激反應(yīng)、低氧反應(yīng)、長(zhǎng)時(shí)記憶、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)泛素化等方面，而這些過(guò)程多數(shù)與神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病尤其是AD發(fā)生的病理機(jī)制相關(guān)，提示睡眠缺失與腦老化及神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病可能存在潛在的聯(lián)系，從而幫助我們進(jìn)一步深入理解這些疾病的本質(zhì)。
　　2、維生素C對(duì)睡眠剝奪造成的大鼠神經(jīng)系統(tǒng)損害有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制主要是